tämä tutkimus koostuu kahdesta vaiheesta: vaiheeseen 1 kuuluu rekrytointi ja seulonta, kun taas vaiheeseen 2 kuuluu D-vitamiini ja N-3 lcpufa satunnaistettu, kaksoissokkoutettu, lumekontrolloitu tutkimus (kuva. 1). Intervention kesto on 12 kuukautta.
kaaviokuva tutkimuksen suunnittelu. 1Blood biomarkkerit: 25-hydroxyvitamin D (25(OH)D), red blood cell (RBC) rasvahapot, kalsium, albumiini, iron studies, B12-vitamiini, folaatti, täysi verenkuva ja A-vitamiini.kyselylomakkeet: sosiodemografiikka, lääketieteellinen historia, syöminen/ruokailuaika käyttäytyminen ja ruokapäiväkirja. 2kysymykset: sosiokommunikatiivinen toiminta, aistiongelmat ja poikkeava käyttäytyminen (primaaritulokset); ruoansulatuselimistön oireet (sekundaariset seuraukset), altistuminen auringolle ja ihon väri. Antropometria: paino ja korkeus. 3blood biomarkkerit: 25 (OH)D, RBC rasvahapot, kalsium ja albumiini. Kyselylomakkeet: sosiokommunikatiivinen toiminta, aistiongelmat, poikkeava käyttäytyminen (ensisijaiset tulokset) ja syöminen/ruokailuaika käyttäytyminen ja ruokavalion laatu. Antropometria: paino ja korkeus. 4veren biomarkkerit: 25 (OH) D, kalsium ja albumiini. * Ruoansulatuskanavan oireita (toissijainen tulos) ja lääkitystä / lisähoitoa / haittatapahtumien ilmaantuvuutta / täydentävyyttä seurataan koko tutkimusjakson ajan
Vaihe 1 tarjoaa mahdollisuuden kattavaan kuvaukseen tutkimusjoukosta ravitsemustilanteen (biokemialliset indeksit ja ravinnon saanti), väestötietojen ja lääketieteellisen historian osalta. Vaihe 2 osoittaa D-vitamiinilisän, N-3 Lcpufasin tai molempien tehon ASD-oireiden vähentämisessä.
- osallistujia
- osallistumis-ja poissulkemisperusteet
- Setting
- Vaihe 1-seulonta
- interventiota edeltävä valmiste
- Vaihe 2-D-vitamiini ja n-3 LCPUFA-interventio
- Satunnaistaminen, sokaiseminen ja piilojako
- tiedonkeruu
- verinäytteenotto ja-analyysi
- kyselylomakkeet
- lääkityksen noudattaminen/tutkimusprotokollan noudattaminen
- haittatapahtumat
- tulosten levittäminen
- tietojen käsittely ja tilastoanalyysi
osallistujia
tämä tutkimus on Masseyn yliopiston ja Uuden-Seelannin Waitemata District Health Boardin (Wdhb) yhteistyö. Tutkimuksen kriteerit täyttävien lasten hoitajia lähestyvät ensisijaisesti WDHB: n Kehityskoordinaattorit.
laskimme, että 42 osallistujaa (vähintään 34 osallistujaa, ja mahdollistaen 20% potentiaalisen keskeyttämisen osuuden) tarvittaisiin jokaiseen tutkimuksen haaraan osoittamaan kliinisesti merkittävä ero 80%: n teholla ja 5%: n tilastollisella merkitsevyydellä. Teholaskelmat perustuivat 17 yksikön eroon täydennettyjen ryhmien ja lumelääkkeen välillä muutoksessa lähtötilanteesta päätetapahtumaan Social responsive Scale (SRS) – kokonaispistemäärän perusteella , keskimääräiseen SRS-arvoon ja keskihajontaan 105 ja 24, 7 yksikköä ASD: tä sairastavilla hoitamattomilla lapsilla (vuoden 2015 pilottitutkimuksestamme, julkaisematon). Otoskoko laskettiin alla olevalla kaavalla:
$$ N= 2 {\alpha}^2k / {\left({\mu}_2\hbox { – } {\mu}_1\right)}^2 $$
missä N on ryhmää kohti vaadittava otoskoko, α on SD, K on vakio (7.9 tarkoittaa 80 %: n potenssia ja 5%: n merkitsevyyttä), ja (μ2 − μ1) on SRS: n kokonaispisteiden ero ryhmien välillä.
riittävän tehon varmistamiseksi riippumaton kolmas osapuoli tekee sokkoutetun välianalyysin, jonka suuruus on >50% alun perin suunnitellusta ilmoittautumisesta, arvioidakseen mahdollisen otoskoon kasvun varianssin.
osallistumis-ja poissulkemisperusteet
lapset voivat osallistua tähän tutkimukseen, jos he ovat yli 2-vuotiaita.5-ja 8-vuotiaat, joilla on sekä kehityshäiriöisen lastenlääkärin vahvistama ASD-diagnoosi Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders-käsikirjan viidennen version (DSM-5) kriteerien mukaisesti ja oireiden alkaminen 18 kuukauden iän jälkeen. 2,5 vuoden alaraja on valittu psykologisten Arviointityökalujen ikäkriteerien perusteella ja 8 vuoden yläraja on valittu puberteettiseen vaiheeseen liittyvien käyttäytymismuutosten sekoittavan vaikutuksen välttämiseksi. Hoitajan englannin kielen taito on vaatimus (johtuen lopputuloksen Arviointityökalujen luonteesta). Vapaaehtoisia ei oteta mukaan, jos heillä on todettu kehityksen viivästyminen syntymästä lähtien.
muita tutkimukseen osallistumiskriteerejä ovat: maksan toiminta normaalialueella(albumiini 34-48 g/L) ja seerumi 25 (OH)d <75 + 10 nmol/L, jos he osallistuvat tutkimukseen talvella, ja <105 nmol/l + 10 nmol/L, jos he osallistuvat tutkimukseen kesällä. Vaihtelu 10-nmol/L valittiin mahdollisen määritysvaihtelun vuoksi . Olemme soveltaneet kahta eri raja-arvoa poissulkemiseen, koska seerumin 25(OH)D-pitoisuuksissa on Uudessa-Seelannissa suurta kausivaihtelua, joka vaihtelee välillä 30 nmol/L-44 nmol/L .
Setting
tutkimus tapahtuu Aucklandissa, Uudessa-Seelannissa. Paastoamattomat verinäytteet kerätään North Shoren tai Waitakeren sairaaloissa Aucklandissa Uudessa-Seelannissa. Kyselylomakkeet ja antropometria tehdään Masseyn yliopistossa, Aucklandissa, Uudessa-Seelannissa. Auckland on Uuden-Seelannin suurin kaupunki hieman yli miljoonalla asukkaallaan. On arvioitu, että noin 13,000 (32,5 %) yksilöiden ASD asuu Greater Aucklandin alueella .
Vaihe 1-seulonta
seulonta ja rekrytointi (tutkimuksen Vaihe 1) toteutetaan 24 kuukauden aikana, joka alkoi tammikuussa 2015. Lapset, jotka täyttävät alkuperäiset sisällyttämisen kriteerit, otetaan verikokeeseen ja seulotaan ravitsemuksellisten puutteiden varalta. Katso taulukoista 1 ja 2 tulokset, testausmenetelmät ja ilmoittautumisaikataulu, interventio ja arviointi.
interventiota edeltävä valmiste
ennen satunnaistamista ja tutkimukseen sisällyttämistä D-vitamiinin, raudan ja B12-vitamiinin puutostilat on korjattava. Taulukossa 3 on luettelo ravitsemuksellisista puutteista ja tässä kokeessa sovelletuista hoitostrategioista.
Vaihe 2-D-vitamiini ja n-3 LCPUFA-interventio
interventio koostuu 2000 IU: sta D3-vitamiinia päivässä, 722 mg DHA: ta päivässä, 2000 IU D3-vitamiinia plus 722 mg DHA: ta päivässä tai lumelääkkeestä neljän suun kautta otettavan kapselin muodossa. Käsittelymateriaalit toimitetaan 750 mg: n geelikapseleissa, joissa on Douglas Nutrition Ltd: n valmistama ja toimittama repäisysuutin., Auckland, Uusi-Seelanti. Tutkimuskapselit, D-vitamiini, N-3 LCPUFAs ja lumelääke ovat samannäköisiä ja kaikki mauttomia ja värittömiä. Lapsen on nautittava neljän kapselin sisältö päivässä sekoitettuna haluamaansa ruokaan tai suun kautta annettuna ruiskulla. Kunkin kapselin päivittäinen kokonaissaanti ja-sisältö on esitetty taulukossa 4. Koko tutkimusjakson ajan lapset saavat käyttää mitä tahansa autismin hoitoon tarkoitettua hoitoa tai lääkitystä sekä mitä tahansa täydennystä edellyttäen, että se ei sisällä D-vitamiinia tai omega-3: a.
2000 IU: n D3-vitamiinilisän on osoitettu olevan turvallinen annos imeväisille, ja Ranskan Lastentautiyhdistys suosittelee 1000-1200 IU päivässä rintaruokinnassa oleville imeväisille . Tutkimuksessamme 2,5–8-vuotiaiden painoindeksi on huomattavasti suurempi kuin imeväisten, minkä pitäisi vähentää haittavaikutusten riskiä entisestään. Lisäksi 2000 IU / vrk on alle IOM: n 1-3-vuotiaille ja 3000 IU/vrk ehdottaman turvallisen ylärajan.
DHA-annos 722 mg/vrk on fysiologisesti merkityksellinen ja saavutettavissa ruokavaliolla (vastaa noin kolmea annosta rasvaista kalaa viikossa), ja se on verrattavissa annoksiin, joita käytettiin muissa tutkimuksissa lapsilla, joissa tutkittiin n-3 LCPUFAs: n vaikutuksia käyttäytymiseen ja oppimiseen . Haittavaikutuksia ei ole raportoitu lapsilla, joiden DHA-annos on 600 mg/vrk .
Satunnaistaminen, sokaiseminen ja piilojako
lapset jaetaan satunnaisesti yhteen neljästä ryhmästä, jotka on ositettu ASD: n iän ja vaikeusasteen mukaan. Aktiivisen / lumelääkekapselin satunnaistaminen, satunnaistettu sekvenssiluettelo ja ryhmäkoko salataan kokonaan tutkijoilta, lapsilta ja hoitajilta koko tutkimuksen ajan, mukaan lukien tietojen analysointi. Kolmas osapuoli, joka ei osallistu mihinkään tutkimuksen osa-alueisiin, luo satunnaisen lohkomallin neljän ja kahdeksan lohkoina käyttäen Randomization.com (http://www.randomization.com/). Kolmas osapuoli antaa lapselle hoitokoodin, kun hänen kelpoisuutensa tukitoimiin on varmistunut ja huoltajan suostumus saatu. Hätätilanteessa, jossa vaaditaan sokean murtamista, Päätutkija aikoo ottaa yhteyttä satunnaistamisesta vastaavaan kolmanteen osapuoleen ja paljastaa tietyn osallistujan hoitotehtävän.
tiedonkeruu
osallistujat (hoitajat ja lapset) osallistuvat Masseyn yliopiston Human Nutrition Research Unit (hnru) – tutkimusyksikköön kahteen otteeseen: lähtötilanteessa ja 12 kuukauden ajan. Kun rekrytoidaan vaiheeseen 2 ja ennen kuin annetaan 4 kuukauden tarjonnan täydentää, hoitajat täyttää joitakin kyselylomakkeita ydinoireita ASD (sociocommunicative toiminta ja aistinvaraisia kysymyksiä) ja poikkeavaa käyttäytymistä kuin tutkimuksen ensisijainen tulos toimenpiteitä, ja ruoansulatuskanavan oireita kuin toissijainen tulos toimenpide. Kun toimenpide on suoritettu (12 kk), hoitajien suorittamat ASD: n ydinoireiden ja poikkeavan käyttäytymisen perusarviot toistetaan. Hoitajat suorittavat myös viikoittaisia maha-suolikanavan oirepäiväkirjoja tutkimusjakson aikana.
tutkimuspopulaation ominaisuuksista kerätään lisätietoja lähtötilanteessa. Näitä tietoja ovat muun muassa syöminen – /ruokailukäyttäytyminen, ruokapäiväkirjat, auringolle altistuminen, ihonväri ja antropometria (paino ja pituus). Viimeisellä käynnillä toistetaan perusarvio syömiseen/ruokailuun liittyvästä käyttäytymisestä ja mitataan lasten paino/pituus. Taulukossa 1 esitetään tulokset ja testausmenetelmät.
verinäytteenotto ja-analyysi
lapsilta otetaan verinäytteet kolmeen otteeseen: lähtötaso (Vaihe 1 – seulonta), 6 kuukautta (turvallisuustoimenpiteet) ja 12 kuukautta (päätetapahtuma). Katso ravintomarkkerit ja testausmenetelmät taulukosta 1. Paastoamattomat verinäytteet kerätään lasten henkilökunnan valvonnassa ja käsitellään North Shore-tai Waitakere-sairaaloissa WDHB-laboratoriopalvelussa. Ravitsemukselliset biomarkkerit määritetään laskimoverinäytteestä. Näitä ovat muun muassa seuraavat: 25 (OH)D, RBC-rasvahapot, kalsium, albumiini, rautatutkimukset, B12-vitamiini ja folaatti, täydellinen verenkuva ja A-vitamiini.RBC-rasvahappoja ja A-vitamiinia lukuun ottamatta kaikki biomarkkerit analysoidaan North Shore Hospitalissa. RBC-rasvahapot analysoidaan Wollongongin yliopistossa NSW: ssä Australiassa ja A-vitamiini Masseyn yliopiston laboratoriossa Aucklandissa Uudessa-Seelannissa.
kyselylomakkeet
ensisijaiset tulosmittarit ovat ASD: n ydinoireiden ja samanaikaisen ongelmakäyttäytymisen psykologisia arviointeja, jotka on esitetty yksityiskohtaisesti taulukossa 1. Toissijainen mittaustulos on ruoansulatuskanavan ongelmien arviointi. Kaikille hoitajille annetaan standardoidut ohjeet siitä, miten kyselylomakkeet täytetään heidän käydessään HNRU: ssa. Ennen osallistuja lähtee hnru tutkijat tarkistaa kaikki vastaukset täydellisyyden.
Social Responsiveness Scale™, toinen painos (SRS-2): käytetään SRS-2–versioita ikäryhmille 2.5-4.5 ja 4.5-18 vuotta. SRS-2 tunnistaa ASDs: ään liittyvät sosiaaliset häiriöt ja määrittää niiden vakavuuden sosiaalisen tietoisuuden, sosiaalisen tiedon käsittelyn, vastavuoroisen sosiaalisen viestinnän, sosiaalisen ahdistuneisuuden/välttämisen ja stereotyyppisen käyttäytymisen/rajoitettujen etujen aloilla . SRS-2: n kliininen kelpoisuus ja herkkyys on määritetty ASD-potilailla .
Sensory Processing Measures™ (SPM): käytetään 2-5-ja 5-12-vuotiaille tarkoitettuja SPM-versioita. SPM arvioi lasten aistien käsittelyä, suunnittelua ja ideoita (praxis) sekä sosiaalista osallisuutta. Vaa ’ at mittaavat sosiaalista osallisuutta, näköä, kuuloa, kosketusta, kehotietoisuutta (proprioception), tasapainoa ja liikettä (vestibulaarinen toiminta) sekä suunnittelua ja ideoita (praxis) . Tämä työkalu on standardoitu, validoitu ja sitä käytetään lapsilla, joilla on ASD .
Aberrant Behaviour Checklist (ABC): ABC mittaa erilaisia käyttäytymisongelmia, joita ovat ärtyneisyys, sosiaalinen vetäytyminen, stereotyyppinen käyttäytyminen, hyperaktiivisuus ja sopimaton puhe . Se on validoitu ASD: tä sairastavilla lapsilla, ja sitä on käytetty laajalti ASD: n hoitotulostutkimuksissa .
maha-suolikanavan oireita koskeva kyselylomake: maha-suolikanavan oireita koskeva kyselylomake on suunniteltu erityisesti tätä tutkimusta varten ja sisältää ruoansulatuskanavan oireita, joita on yleisimmin raportoitu ASD-lapsilla . Tutkimukseen osallistuneiden hoitajille annetaan viikoittaiset verkkopäiväkirjat, ja heitä pyydetään kirjaamaan, onko lapsella ollut kuluneen viikon aikana ummetusta, ripulia, ilmavaivoja, vatsakipua, oksentelua/pahoinvointia, vatsan pingottuneisuutta, selittämätöntä päivällä tapahtuvaa ärtyneisyyttä tai/ja selittämätöntä yöllistä heräämistä ja jos on, kuinka monta kertaa näitä on esiintynyt. Maha-suolikanavan oireita koskevaa kyselylomaketta ei ole validoitu, mutta se sisältää kysymyksiä maha-suolikanavan oireista, joita on yleisimmin raportoitu ASD-populaatioissa, tai käyttäytymisestä, joka saattaa johtua maha-suolikanavan oireista. Meillä ei ole tiedossa validoitua välinettä autististen lasten ruoansulatuskanavan oireiden arvioimiseksi, eikä ainakaan Uudessa-Seelannissa.
lasten syömisen Ravintoindeksi (DICE): DICE on yksinkertainen ruokavalion laadun arviointityökalu, jonka tutkimusryhmä on kehittänyt Uuden-Seelannin terveysministeriön terveille lapsille ja nuorille antamien Ruoka-ja Ravitsemusohjeiden pohjalta . Tämä työkalu on validoitu Uuden-Seelannin 2-8-vuotiaiden terveiden lasten kohortissa (julkaisematon), ja se validoidaan ASD-lapsilla tässä tutkimuksessa suhteessa 4 päivän arvioituun ruokapäiväkirjaan ja biokemiallisiin merkkiaineisiin.
Behavioral Chemical Feeding Assessment Scale (Bpfas): BPFAS on yksinkertainen arviointityökalu, joka mittaa lapsen ruokailukäyttäytymistä sekä vanhempien asenteita ja käyttäytymistä. Se on 35 kohdan mittakaava kyselylomake, joka sisältää 25 likert-asteikon (5 pistettä) kysymyksiä lapsen käyttäytymisestä ja 10 kaksijakoista kysymystä vanhempien asenteista ja käyttäytymisestä. BPFAS: n Cut-off-pisteet on hiljattain vahvistettu . BPFAS on luotettavin vanhemman antama ruokintakysely, jolla on hyvä sisäinen validiteetti ja uusintatestin luotettavuus .
neljän päivän arvioitu ruokapäiväkirja: ravinnon saantitiedot kerätään 4 päivän arvioidulla ruokapäiväkirjalla, johon sisältyy yksi viikonloppupäivä. Ruokapäiväkirjan mukana toimitetaan ohjeet ruokapäiväkirjan täsmälliseen täydentämiseen. Osallistujille annetaan ilmainen, etukäteen osoitettu kirjekuori vihkon palauttamista varten. Keskimääräinen makro-ja mikroravinteiden saanti arvioidaan neljän raportoidun päivän aikana käyttäen FoodWorks Professional Edition 7: ää (Xryis Software, Brisbane, QLD, Australia, 2012).
tässä tutkimuksessa 4 päivän ruokapäiväkirja valittiin pidempien ruokapäiväkirjojen, kuten 7 päivän ruokapäiväkirjan, suuren vastaajarasituksen ja aikaa vievien ominaisuuksien vuoksi. Koska ravintoaineiden saannissa on suurta vaihtelua ihmisen sisällä, on suositeltavaa kirjata ravinnon saannit pidemmältä ajalta, jotta saantiarvio olisi erittäin tarkka. Jos kuitenkin 4 päivän ruokapäiväkirja kattaa eri päivät satunnaisesti, se voi antaa tarkkoja arvioita ravinnon saannista .
tietoja auringolle altistumisesta ja ihonväristä, ravintolisistä ja mahdollisista erityisruokavaliovalmisteista kerätään kyselylomakkeilla, jotka on erityisesti suunniteltu tätä tutkimusta varten. Auringolle altistumista koskevaan kyselyyn sisältyy kysymys hoitajan uskomuksista ja asenteista auringolle altistumiseen sekä kysymyksiä asuinmaasta ja-Kaupungista raskauden aikana, syntymäajasta ja lapsen herkkyydestä lämpötilan ja valon ääri-ilmiöille.
lääkityksen noudattaminen/tutkimusprotokollan noudattaminen
hoitajat saavat viikoittain sähköposteja, joissa on linkki online compliance and gastrointestinal issues diary and a tip / fact about autism and nutritional matters. Hoitajiin otetaan yhteyttä puhelimitse 1, 3, 6 ja 9 kuukauden iässä moraalin vuoksi ja sääntöjen noudattamiseen kannustamiseksi. Hoitajat saavat myös neljännesvuosittain kokeiluilmoituksia. Uutiskirjeet sisältävät päivityksen tutkimuksesta, ASD: tä koskevista yleisistä aiheista, hoitajan kokemuksista kyseiseen aiheeseen liittyen sekä viihdytyksistä/kilpailuista tutkimuslapsille.
osallistujille lähetetään 4 kuukauden välein uutta interventioaineistoa, ja hoitajia pyydetään panemaan aikaisempien kuukausien pullot sivuun ja mahdolliset käyttämättömät kapselit takaisin seuraavalla käynnillä (6 tai 12 kuukautta), jolloin käyttämättömät kapselit lasketaan ja kirjataan. Hoidon noudattamista arvioidaan laskemalla kunkin osallistujan jäljellä olevat lisät toimenpiteen päätyttyä.
haittatapahtumat
kaikki osallistujat kutsutaan kuuden kuukauden kuluttua verikokeeseen hypervitaminoosi D: n (seerumi 25(OH)d >225 nmol/L) ja hyperkalsemian (seerumi Ca > 2, 7 mmol/l) toteamiseksi. Tulokset tarkastaa kolmas osapuoli, joka ei ole sokkoutunut (mutta ei osallistu tulosten analysointiin). Kolmas osapuoli poistaa verikokeiden tulokset ja lähettää ne tutkimuksen lastenlääkärille ja vanhemmalle tutkijalle tarkistettavaksi ja suositettavaksi, jos lapsen seerumi 25(OH)D tai kalsiumpitoisuus ylittää turvallisen ylärajan. Jos 25 (OH)D-pitoisuus on 225 nmol/L tai lähestyy sitä tai jos esiintyy hyperkalsemiaa, annostusta muutetaan.
vaatimustenmukaisuutta ja ruoansulatuskanavan oireita koskevia päiväkirjoja seurataan viikoittain, ja kaikki haittavaikutukset kirjataan haittatapahtumalokiin, jotta voidaan seurata lapsen yleisiä terveys-ja käytöshäiriöitä. Mahdollisten haittatapahtumien tapauksessa lapsen terveyttä seurataan tarkemmin kolmen tai neljän peräkkäisen viikon ajan, ja jos haittavaikutus jatkuu, raportit lähetetään tutkimuksen lastenlääkärille ja vanhemmalle tutkijalle jatkotutkimuksia varten.
tulosten levittäminen
ruokapäiväkirjan vastaanottamisen ja analysoinnin sekä seulonnassa tehtyjen biokemiallisten määritysten jälkeen jokainen osallistuja saa palautelomakkeen. Myös antropometriset mittaukset ja veritulokset (rautatutkimukset, B12-vitamiini, folaatti ja täysi verenkuva) otetaan mukaan. Kun tutkimukseen rekrytointi on saatu päätökseen, osallistujat, jotka eivät ole edenneet kokeeseen, saavat ilmoituksen D-vitamiini-ja RBC-rasvahappotasoistaan.
tutkimuksen päätyttyä osallistujille ilmoitetaan heidän lähtötilanteensa ja loppuvaiheen D-vitamiinin ja RBC: n rasvahappotilanteensa sekä se, ottivatko he vaikuttavaa ainetta vai lumelääkettä. He saavat myös yhteenvedon SRS-2: n ja SPM: n psykologisista arviointituloksista.
osallistujat ja muut sidosryhmät (kuten terveydenhuollon ammattilaiset, piiriterveyslautakunnat, perusterveydenhuollon järjestöt, ASD-tukiryhmät) saavat tutustua tutkimuksen tuloksiin. Tulokset esitellään tieteellisissä konferensseissa sekä kansallisesti että kansainvälisesti, valmistellaan julkaistavaksi vertaisarvioiduissa lehdissä ja levitetään tiedotusvälineille.
tietojen käsittely ja tilastoanalyysi
nimi-ja osoitetiedot säilytetään Microsoft Excelissä. Valintaruutuihin kirjataan osallistujan eteneminen tutkimuksen läpi. Kaikki muut tiedot syötetään yhteen Microsoft Excel-taulukkolaskentaan, jossa osallistujat tunnistetaan vain niiden yksilöivän Aihenumeron perusteella. Psykologi ja tutkija tarkastavat kyselylomakkeiden tulokset kahteen kertaan. Tutkimusryhmän toinen jäsen tarkastaa kaikki merkinnät kahteen kertaan. Kaikki asiakirjat säilytetään turvallisesti luottamuksellisissa olosuhteissa ja arkistoidaan 5 vuoden ajan.
tilastoanalyysi tehdään IBM SPSS version 21.0 (IBM Corp; julkaistu 2012. IBM SPSS Statistics for Windows-versio 21.0. Armonk, NY, Yhdysvallat). Ennen tilastollisen analyysin aloittamista tiedot puhdistetaan ja tarkistetaan koodausvirheiden varalta. Tietojen uskottavuus tarkistetaan tarkastamalla niiden paikkansapitävyys ja täydellisyys satunnaisesti ja vertaamalla niitä lähdetietoihin. Muuttujia testataan normaaliuteen Kolmogorovin-Smirnovin testin, Shapiron-Wilkin testin ja normaaliuden käyrien avulla. Ei-normaalisti jakautuneet tiedot muunnetaan likimääräisiksi normaalijakaumiksi logaritmisilla muunnoksilla. Tiedot ilmoitetaan asianmukaisesti keskiarvona (keskihajonta) tavanomaisesti jaettujen tietojen osalta; muunnetut tiedot muunnetaan yhteenvetotilastoista geometrisiksi keskiarvoiksi (95%: n luottamusväli), jakamattomat tiedot kuvataan mediaaneina (25.ja 75. prosenttipisteet) ja kategoriset tiedot frekvensseinä.
osallistujien Lähtötilanneominaisuuksia verrataan ryhmien välillä käyttäen muuttujatietojen varianssianalyysiä (ANOVA) ja ei-parametristen tietojen Kruskal-Wallis-testiä. Primaarianalyysi, jossa vertaillaan hoidon vaikutuksia autismin kirjon oireisiin 12 kuukauden ajalta, tehdään yleistetyllä lineaarisella sekamallimenetelmällä. Hoidot ja aika otetaan mukaan kiinteinä vaikutuksina ja interventioiden ja ajan välistä vuorovaikutusta testataan. Jos havaitaan merkittäviä pääasiallisia vaikutuksia tai yhteisvaikutusvaikutuksia, tehdään post-hoc-analyysi Bonferronin muutoksilla. Mahdollisia sekoittavia tekijöitä ja vaikutusmuuttajia (esim.lähtötason 25(OH)D-ja RBC-rasvahapot, autismin oireet lähtötasolla, ikä ja sukupuoli) tutkitaan mallissa. Logistista regressiota käytetään multiplikatiivisen vuorovaikutuksen testaamiseen. Rothmanin synergia-indeksiä, joka olisi yhtä kuin ykseys additiivisuudessa ja vähemmän kuin ykseys antagonismia ehdottaessa, käytetään tutkittaessa D-vitamiinin ja omega-3 Lcpufasin oletettua yhteisvaikutusvaikutusta ASD: n ydinoireisiin.
toissijainen analyysi, jossa verrataan hoidon vaikutuksia maha-suolikanavan oireisiin 12 kuukauden aikana, tehdään samaa menettelyä käyttäen. Mahdolliset sekoittavat tekijät ja vaikutuksen muuttajat (esim.maha-suolikanavan oireiden alkutaso ja lääkitys/täydennyskäyttö) tutkitaan mallissa.
erot tutkimuksen loppuun vievien ja siitä vetäytyvien osallistujien välillä analysoidaan riippumattomalla t-testillä tai Mann-Whitney-testillä jatkuvien muuttujien (esim.ikä) ja Chi-square-testillä kategoristen muuttujien (esim. sukupuoli) osalta.
lähtötilanteen ASD-oireiden vakavuuden ja ravitsemustilanteen (erityisesti D-vitamiinin, RBC-rasvahappojen, raudan ja B12-vitamiinin) välisiä yhteyksiä arvioidaan regressioanalyysin avulla. Tietoja käytetään arvioitaessa hoitovastetta ravitsemuksellisen tilan tertiilien mukaan, mikä osoittaa merkittävää yhteyttä ASD: n vaikeusasteeseen.
käytetään sekä intention-to-treat-että Per-protocol-analyysejä, joskin ensisijainen analyysimenetelmä on intention-to-treat. Tilastollinen merkitsevyys perustuu kaksipyrstötesteihin, joiden P <0, 05 katsotaan merkitseviksi.
