Giemsa Stain: Principle, Procedure and Results

Giemsa stain on eräänlainen Romanowsky stain, joka on nimetty värjäysliuoksen luoneen saksalaisen kemistin Gustav Giemsan mukaan. Se suunniteltiin ensisijaisesti malarialoisten osoittamiseen veritahroissa, mutta sitä käytetään myös histologiassa rutiininomaiseen veren preparointiin.

Giemsa-värjäyksen käyttötarkoitukset

malarialoisten värjäyksen lisäksi Giemsa-tahralla on useita käyttökohteita mikrobiologiassa ja patologiassa:

• Giemsa-tahraa käytetään valkosolujen erittelyyn.
• sitä käytetään myös eri verisolujen, kuten verihiutaleiden, RBC: n ja WBC: n, ydin-ja sytoplasmamorfologian erottamiseen.
• mikrobiologiassa Giemsa-tahraa käytetään Chlamydia trachomatis-ja Borrelia-lajien sisäelinten värjäämiseen, ja jos Waysonin tahraa ei ole saatavilla, Yersinia pestisin värjäämiseen. Giemsa-tahraa käytetään myös Histoplasma capsulatumin, Pneumocystis jirovecin, Klebsiella granulomatisin, Penicillium marneffein ja joskus bakteerikapselien värjäämiseen.
• tätä tahraa käytetään myös sytogenetiikassa kromosomien värjäämiseen ja kromosomipoikkeavuuksien tunnistamiseen. Sitä käytetään yleisesti G-banding (Giemsa-Banding)

Giemsa Stain

Giemsa stain on differentiaalitahra, joka sisältää taivaansinisen, Metyleenisinisen ja eosiinivärin seosta. Se on spesifinen DNA: n fosfaattiryhmille ja kiinnittyy niihin, joissa on suuria määriä adeniini-tymiinisidosta.

taivaansininen ja eosiini ovat happamia väriaineita, jotka vaihtelevasti tahraavat solujen peruskomponentteja, kuten sytoplasmaa, rakeita jne.

metyleenisininen toimii emäksisenä väriaineena, joka värjää happamat komponentit, erityisesti solun tuman.

metanoli toimii kiinnikkeenä sekä solutahrana. Kiinnitysaine ei salli enää muutoksia soluissa ja tekee niistä kiinni lasilevyyn.

Giemsa-värjäyksen koostumus

Giemsa-värjäyksen koostumus voidaan valmistaa kotona Giemsa-tahrajauheella tai sitä voidaan saada kaupallisesti. Molempien perusainesosat ovat samat, mutta laimennoksia voidaan tehdä käytöstä riippuen.

menettely

A. tahran sisäinen valmistelu:

1. punnitaan tarvittava määrä jauhetahraa ja siirretään puhtaaseen, kuivaan 1litran tilavuuspulloon. Lisää metanoli ja sekoita hyvin.
2. mittaa ja lisää glyseroli ja sekoita hyvin.
3. tahrapullo asetetaan vesihauteeseen 50-60°C: n tai 37°C: n lämpötilaan enintään 2 tunnin ajaksi ja sekoitetaan usein.
4. merkitse pullo ja säilytä viileässä, pimeässä paikassa, jossa on kiinteä tulppa.

HUOMAUTUS: Jos vesi joutuu kosketuksiin tahran valmistusvaiheen aikana, tahra pilaantuu, joten käytä, kuivaa lasiesineet ja säilytä olosuhteissa, joissa ei olisi vesikontaktia.

• suodatin suodatetaan Whatman filterpaper no. 1: llä ja laimennetaan vedellä, joka on puskuroitu pH 7.2: een, jotta saadaan työliuoksia

B.

värjäyksessä käytetty menetelmä värjäykseen, pitoisuuteen ja värjäyksen ajoitukseen vaihtelee käyttötarkoituksen mukaan, esimerkiksi ohuissa veritahroissa käytetään 1:20-laimennosta, kun taas paksuissa veritahroissa käytetään 1:50-laimennusta.

ForThin-veritahra

1. kiinnitä ilmakuivattu kalvo absoluuttiseen metanoliin kastamalla kalvo lyhyesti (kaksi dippiä) absoluuttista metanolia sisältävään Kopliinipurkkiin.
2. Poista ja anna ilman kuivua.
3. tahra laimennetulla Giemsa-tahralla (1:20, vol/vol) 20 min (1:20 laimennetaan, lisätään 2 ml stock Giemsa-valmistetta 40 ml: aan puskuroitua vettä Koplin-purkissa).
4. pese dia upottamalla dia lyhyesti puskuroitua vettä sisältävään Kopliinipurkkiin ja siitä ulos (yksi tai kaksi dippiä).
   Huomautus: liiallinen pesu dekolorisoi kalvon.
5. anna ilman kuivua pystyasennossa. Tarkkaile mikroskoopilla ensin 40-kertaisesti ja sitten käyttämällä öljyherätyslinssiä

veritahroja

1. annetaan kalvon kuivua huolellisesti useita tunteja tai yön yli. Älä kuivaa kalvoja inkubaattorissa tai lämmön avulla, koska tämä korjaa veren ja häiritsee RBC: n lyseämistä.
   Huom: jos malaria todetaan nopeasti, paksuista kalvoista voidaan tehdä hieman tavallista ohuempia, niiden annetaan kuivua 1 tunti ja värjätään sitten.
2. EI SAA KORJATA.
3. tahra laimennetulla Giemsa-tahralla (1:50, vol/vol) 50 minuutin ajan (1: 50 laimennoksessa lisätään 1 ml giemsaa 50 ml: aan puskuroitua vettä Koplin-purkissa)
4. pestään asettamalla kalvo puskuroituun veteen 3-5 minuutiksi.
5. anna ilman kuivua pystyasennossa ja tarkkaile mikroskoopilla ensin 40 kertaa ja sitten käyttämällä öljykylpylinssiä

Chlamydia trachomatis

noudata edellä mainittuja vaiheita, mutta laimealla tahralla 1:40 laimennusta (lisätään 0, 5 ml stock Giemsa-liuosta 19, 5 ml: aan puskuroitua vettä) ja jätä tahra 90-120 minuutiksi.

havainto:

mikroskooppitutkimuksessa erotetaan solujen organellit, bakteerit ja loiset niiden morfologian ja värin perusteella;