perinteisen Kalsinoinnin ja Mikroaaltoavusteisen menetelmän Vertailu luukudoksessa, jolla on Mycetooma

Abstrakti

Mycetooma on elinikäinen granulomatoottinen ihonalaiskudosten ja luiden sairaus. Histopatologia on perusteltu suuntaa antava menetelmä, joka perustuu oletukseen mycetooman lopullisesta diagnoosista. Se vaatii kudosten tehokasta käsittelyä, mukaan lukien luun kalkinpoisto. Kalkinpoistoprosessin on varmistettava kalsiumin täydellinen poistaminen ja myös kudosten ja mikro-organismien värjäyskyvyn asianmukainen säilyminen. Tavoite. Vertaamalla perinteistä kalsinoinnissa käytettyä menetelmää mikroaaltomenetelmään, jossa käytetään erilaisia kalsinointiliuoksia. Tutkimuksessa testattiin erilaisia ominaisuuksia, kuten kalsinoinnin nopeutta sekä morfologista ja sienimäistä säilyvyyttä myketoomasta kärsivässä luukudoksessa. Materiaalit ja menetelmät. Kalsiumin poistamiseksi käytettiin kolmea kalkinpoistoliuosta 50: stä mycetoomaa sairastavasta luukudosnäytteestä, mukaan lukien 10-prosenttisesti neutraalia puskuroitua EDTA: ta (pH 7, 4), 5-prosenttista typpihappoa ja 5-prosenttista suolahappoa. Käytettiin tavanomaisia ja mikroaaltomenetelmiä. Hematoksyliini – Eosin (HE) stain, Gridley ’ s stain ja Grocott hexamine-silver stain käytettiin arvioimaan luun ja sienten morfologioita. Tulos. Perinteisen menetelmän kalsinointiaika verrattuna mikroaaltomenetelmään, jossa EDTA oli 10% (pH 7,4), kesti 120 tuntia ja 29 tuntia, kun taas 5% suolahappoa ja 5% typpihappoa kesti erikseen 8 tuntia ja 3 tuntia. Myös 10% EDTA on paras kalkinpoistoaine värjäykseen ja sienitahroihin. Sienivärjäykseen voidaan käyttää 5-prosenttista suolahappoa ja 5-prosenttista typpihappoa. Päätelmä. Tässä tutkimuksessa selvitettiin eri kalkinpoistoaineiden sekä kahden kalkinpoistomenetelmän vaikutuksia luuston rakenteen säilymiseen ja sienivärjäykseen, mikä auttaa kehittämään sopivia protokollia mycetoma-infektiosta kärsivän luukudoksen analyyseihin.

1. Johdanto

Mycetoma on elinikäinen granulomatoottinen, vähitellen tappava epidemia ihon ja ihonalaiskudosten sairaus, joka voi edetä syvempiin rakenteisiin, kuten lihaksiin ja luihin, ja johtaa laajaan tuhoon, pääasiassa jalkoihin, vaatien laajoja paikallisia kirurgisia leikkauksia tai raajan amputaatiota . Mycetooma määritellään paisumisen, uuvuttavien poskionteloiden ja kolonialististen jyvästen olemassaolon triumviraattina tulehdusnesteessä . Infektio luokitellaan eumycetoma (sieni-infektio) tai aktinomycetoma (bakteeri-infektio). Se elää laajalti trooppisilla ja puolitrooppisilla alueilla, huomattavasti Sudanissa . Madurella mycetomatis crop jyvät ovat valtavia, vaihtelevat 0,5-3 mm, ja näyttävät pyöristetty, soikea, tai trilobed. Ne koostuvat ristikkäin hyphae juurtunut interstitiaalinen rusehtava sementti, joka koostuu melaniinin kaltainen, mustanruskea pigmentti . Histopatologia on nopea suuntaa antava menetelmä sekä edullinen prosessi, joka perustuu oletukseen mycetoma-taudin lopullisesta diagnoosista ja sisältää raportin, jossa kuvataan aiheuttajien morfologinen esitys. Aiheuttaja voidaan vielä eristää mukana olevasta luukudoksesta . Kalsinointi on perusvaihe, joka on yleisesti saavutettu luiden histopatologisessa tutkimuksessa . Luiden mineraalit koostuvat kalsiumista ja fosforista, ja liukenemattomat suolat muodostavat yli kuusikymmentä prosenttia luukudoksesta . Nämä mineraalit tarjoavat luun kovuutta ja aiheuttavat vaikeuksia kudoksen leikkauksessa pyörivien mikrotomien avulla . Tällaisia kudoksia on käsiteltävä kalsiumfosfaatin uuttamiseksi niin sanotulla kalkinpoistomenetelmällä tekemällä kudoksesta niin herkkä, että se voidaan leikata mikrotomilla. Kalsinointi tapahtuu hapoilla, jotka muodostavat liukoisia kalsiumsuoloja tai kelatoivia aineita, jotka sitoutuvat kalsiumioneihin. Nykyisille perinteisille kalkinpoistomenetelmille on ominaista työläät prosessit ja kudosten värjäysreaktion jatkuva epäonnistuminen . Tavanomaisessa kalkinpoistomenetelmässä luukudokset asetetaan huoneenlämpöiseen kalkinpoistonesteeseen, jossa liuosta vaihdetaan säännöllisin väliajoin, kunnes päätepiste on saavutettu. Mikroaaltokalsifikaatio on perinteiseen menetelmään verrattuna innovatiivinen tekniikka . Tässä prosessissa kiinteät kudokset asetetaan mikroaaltouunissa olevaan kalkinpoistoliuokseen määräajoin niin, että kalkinpoistonesteet siirtyvät tavanomaisesti loppupisteen saavuttamiseen asti. Mikroaaltosäteilyllä on pyritty nopeuttamaan kalkinpoistoa noin päivistä tunteihin . Tämän tutkimuksen tavoitteena oli verrata perinteistä kalsinoinnissa käytettyä menetelmää muunneltuun mikroaaltomenetelmään, jossa käytettiin erilaisia kalsinointiliuoksia. Testattiin erilaisia ominaisuuksia, kuten kalsinoinnin nopeutta sekä morfologista ja sienimäistä säilymistä madurella mycetomatis-infektion sairastamassa luukudoksessa.

2. Materiaalit ja menetelmät

tämä on kokeellinen kuvaileva tutkimus, jonka tarkoituksena on verrata tavanomaista kalkinpoistomenetelmää mikroaaltotehosteiseen kalkinpoistoon mycetoma-infektion aiheuttaman kudoksen morfologian osalta käyttäen hematoksyliinia ja eosiinia, Gridleytä ja Grocott hexamine-silver-tahroja madurella mycetomatis-syy-organismien täydelliseen tunnistamiseen. Tutkimus tehtiin Soban yliopistollisen sairaalan Mycetoma Research Centerissä ja Al Neelainin yliopiston lääketieteellisessä Laboratoriotieteellisessä tiedekunnassa. Kaikilta potilailta saatiin kirjallinen tietoon perustuva suostumus. 50 amputoitua raajaa, joilla oli mycetoma, kerättiin. Luubiopsiat leikattiin sopivalla sahalla 5 mm: n paksuisiksi paloiksi, minkä jälkeen ne kiinnitettiin 10%: n muodolliseen suolaliuokseen 48 tunniksi. Niitä pestiin juoksevan vesijohtoveden alla 30 minuuttia kiinnikkeen poistamiseksi.

2.1. Tavanomainen kalsinointi

kolme kappaletta 5 mm: n paksuisia luukoepaloja upotettiin kolmeen 250 ml: n Pyrex Squat-dekantterilasiin, joissa kussakin oli 100 ml 5% kloorivetyhapon (HCl) vesiliuosta, 5% typpihapon vesiliuosta (HNO3) ja 10% etyleenidiamiinitetraetikkahappoa (EDTA) huoneenlämmössä (keskimäärin 28°C), KS.Taulukko 1. Kalsinoinnin päätepiste tarkastettiin kalsiumoksalaattimenetelmällä kahden happaman kalsinaattorin (5% HNO3 ja 5% HCl) osalta kahden tunnin välein seuraavasti:: 5 ml käytettyä kalkinpoistonestettä otettiin ja pantiin koeputkeen, sitten lisättiin litmuspaperia ja ammoniakkihydroksidia tippa kerrallaan, kunnes litmuspaperi muuttui, mikä osoitti, että emäksinen pH: n kalkinpoistoneste oli kirkasta. Tyydyttynyttä ammoniumoksalaattiliuosta lisättiin 5 ml, kun kalkinpoistoliuos muuttui sameaksi, mikä osoitti kalsiumin esiintymisen luukudoksessa, jolloin kalkinpoistoliuos korvattiin uudella liuoksella, ja prosessi toistettiin 30 minuutin välein, kunnes kalkinpoistoprosessi saatiin päätökseen. EDTA: ssa käytettiin kalkinpoistoaineen fysikaalista testausta, jossa kalkinpoistoprosessin katsottiin päättyneen, kun luu läpäistiin helposti neulalla. Keskimääräinen kokonaisaika, jolloin kalsinointi oli poistettu, oli 7 tuntia ja 30 minuuttia, 8 tuntia ja 120 tuntia 5%: n typpihapon, 5%: n HCl: n ja 10%: n EDTA: n osalta.

2.2. Mikroaaltouuni menettely

talon mikroaaltouuni (Midea Mikroaaltouuni 20l, 700W, Digital, EM720CFF) kiinteällä pyörivä levy käytettiin. Lasinen dekantterilasi, jossa oli 100 ml tislattua vettä, esilämmitettiin 5 sekunnin ajan magnetronin lämmittämiseksi. Tämä korvattiin 100 ml: lla tuoretta tislattua vettä ja säteilytettiin lämpötilan ylläpitämiseksi noin 41-43°C: ssa.tämä kesti 15 sekuntia. Lasilasi kohdistettiin uunin eri kohtiin säteilytyksen aikana näytteen parhaan sijainnin selvittämiseksi mikroaaltouunissa tapahtuvan kalkinpoistamisen aikana, koska käytettävässä mikroaaltouunissa oli jatkuva ajoitus, mutta ei tasainen lämpötila. Kolme kappaletta 5 mm: n paksuisia luukoepaloja upotettiin 250 ml: aan Pyrex Squat-dekantterilasiin, jotka sisälsivät 100 ml 5% suolahapon (HCl), 5% typpihapon (HNO3) ja 10% EDTA: n vesiliuosta. Sitten ne siirrettiin mikroaaltouuniin, ja näytteitä säteilytettiin kymmenen jaksoa kymmenen sekuntia kutakin (15 minuutin välein) yhteensä 2-4 tuntia happojen kalkinpoisto (5% HNO3 ja 5% HCl). Kalkinpoistoliuoksen lämpötila pidettiin noin 41-43°C: ssa.kalkinpoistoliuos ja kalkinpoistamisen päätepiste tarkastettiin, ja kalkinpoistoliuosta muutettiin toistuvasti, kunnes kalkinpoisto saatiin päätökseen. Kalsinoinnin päätepiste tarkastettiin kalsiumoksalaatilla ja fysikaalisilla testeillä kuten edellä todettiin. Keskimääräinen kokonaisaika, jolloin kalsinointi oli poistettu, oli 3 tuntia ja 45 minuuttia, 5 tuntia ja 30 minuuttia, ja vastaavasti 29 tuntia ja 4 minuuttia 5%: n typpihapon, 5%: n HCl: n ja 10%: n EDTA: n osalta. Täydellisen kalsinoinnin jälkeen kudokset pestiin tislatulla vedellä ja siirrettiin 5 minuutin ajan 0,3-prosenttiseen ammoniakkiliuokseen käytetyn hapon neutraloimiseksi.

2.3. Kudoskäsittely ja värjäys

näytteille tehtiin automaattinen kudoskäsittely käyttäen seuraavia protokollia: luubiopsiat laitettiin 10-prosenttiseen formaaliin suolaliuokseen yhdeksi tunniksi. Sitten 50% alkoholia yksi tunti, 70% alkoholia yksi tunti, 90% alkoholia yksi tunti, jonka jälkeen 100% alkoholia kolme muutosta kahden tunnin välein, ksyleeni kaksi muutosta, kukin puolentoista tunnin ajan, lopuksi parafiini kaksi muutosta kukin kahden tunnin ajan. Kudokset upotettiin parafiinilohkoihin ja leikattiin 5-6 µm: n paksuisiksi pyörivällä mikrotomilla. Osat värjättiin Mayerin hematoksyliinilla Mayerin vuonna 1903 kuvaamalla tavalla, ja vastapainona jokaisessa oli 1% eosiinia (HE) . Gridley ’ s stain was used for fungs demonstration as described by Gridley in 1953); depaffinisaation ja nesteytyksen jälkeen kudososat laitettiin 2-prosenttiseen kromihappoon 30 minuutiksi. Sen jälkeen ne pestiin hyvin vesijohtovedellä, huuhdeltiin tislatulla vedellä ja laitettiin sitten Schiffin reagenssiin 20 minuutiksi. Sen jälkeen niitä pestiin juoksevassa vesijohtovedessä 10 minuutin ajan ja huuhdeltiin 70-prosenttisella etanolilla ja sen jälkeen 95-prosenttisella etanolilla. Niitä torjuttiin Metaniilikeltaisella minuutin ajan ja huuhdeltiin hyvin tislatulla vedellä. Sitten ne dehydratoitiin ksyleeniin ja asennettiin distyreeniin, pehmittimeen ja ksyleeniin (DPX). Sitten osat tutkittiin mikroskoopilla . Myös grocottin vuonna 1955 kuvaamaa sienten heksamiini-hopea-menetelmää käytettiin, jossa lohkot hapetettiin 4%: lla kromihapon vesiliuosta tunnin ajan, pestiin vedessä muutaman sekunnin ajan, käsiteltiin 1%: lla natriummetabisulfiittia yhden minuutin ajan, pestiin juoksevassa vesijohtovedessä 3 minuuttia, huuhdeltiin huolellisesti tislatulla vedellä, laitettiin esilämmitettyyn työhopealiuokseen vesihauteessa 60°C: ssa 20 minuuttia, huuhdeltiin hyvin tislatulla vedellä, pestiin juoksevalla vesijohtovedellä 5 minuuttia, torjuttiin työskentelyssä vaaleanvihreänä 15 sekuntia, kuivattu ja puhdistettu Ksyleenissä ja asennettu DPX, ja lopulta tutkitaan mikroskoopilla.

2.4. Tulosten arviointi

osiot arvioi asiantuntija histopatologi. Myös kalkinpoistomenetelmän ja värjäystuloksen laatu arvioitiin nyrkkisäännön mukaan, ja kalkinpoistomenetelmän laatu arvioitiin seuraavin kriteerein: kalkinpoistoajankohta, kudosmorfologian morfologinen säilyminen ja Madurella mycetomatis-sienet, Gridley and Grocott methenamine-silver-värjäys luokiteltiin 1-4 (1: huono, 2: tyydyttävä, 3: hyvä ja 4: erinomainen) .

2.5. Tilastoanalyysi

Data-analyysi tehtiin SPSS-ohjelmalla. Yksisuuntaista ANOVAA käytettiin osoittamaan kolmen kalkinpoistoliuoksen vaikutus sektioiden laadun ja sienten säilyvyyden kvantitatiiviseen analyysiin. Kruskal-Wallis-testi suoritettiin sen määrittämiseksi, oliko testattujen liuosten välillä merkittävä ero kunkin arvioidun parametrin osalta yhdessä kahden kokeen kanssa. Erot kanssa tulkittiin tilastollisesti merkitseviksi.

3. Tutkimuksessa oli mukana

viisikymmentä madurella mycetomatis-tapausta, joissa oli mustaa viljaa. 48 tapauksessa (96%) ja kahdessa (4,0%) kädessä jalkaterä vaikutti eniten anatomiseen alueeseen. Eri kokeissa tehdyissä kalkinpoistoajoissa kolmesta testatusta liuoksesta kalsinointi 10-prosenttisella EDTA: lla (pH 7,4) kesti perinteisessä menetelmässä pisimmän ajan (jopa 120 tuntia verrattuna 29 tuntiin mikroaaltouunissa), ja hapolla kalkinpoistoliuoksen käyttö kesti lyhyimmän ajan, joka vaihteli 8 tunnista 3 tuntiin eri kalsinointimenetelmissä. Erityyppisten kalsifioivien liuosten kudosmorfologian laadulla, jossa käytettiin kalkinpoistomenetelmää, saatiin vaihtelevia tuloksia verrattuna Mayerin hematoksyliini-ja eosiinivärjäysmenetelmään ydin-ja sytoplasmamaisen ulkonäön osalta. Myös 10% EDTA-kalkkeutuneesta luusta näytti olevan huomattavasti parempi tulos (P-arvo khi-neliötestillä: 0, 023) verrattuna 5% HNO3: een ja 5% HCl: ään. Erinomainen värjäysraportti oli 43 (86%) vs. 32 (64%), 42 (84%) vs. 18 (36%) ja 33 (66%) vs. 1 (2%). Grocott methenamine-silver stain-menetelmää käytettiin madurella mycetomatis-taudinaiheuttajan osoittamiseen sienten morfologiasta ja kirkkaudesta, ja kudososat, joista oli poistettu 10% EDTA: lla, 5% HNO3: lla ja 5% HCl: llä tavanomaisilla ja mikroaaltomenetelmillä, osoittivat huomattavasti paremman sienimorfologian (P-arvo chi-neliötestillä: 0,001) seuraavasti: 33 (66%) vs. 32 (64%), 33 (66%) 39 (78%) ja 22 (44%) 31 (62%). Toinen madurella mycetomatis-sienitahra oli Gridley-tahra, joka koski sienimorfologiaa ja luiden värjäyslaatua, josta oli poistettu kalsinointi 10% EDTA: lla, 5% HNO3: lla ja 5% HCl: llä tavanomaisilla ja mikroaaltomenetelmillä, jotka osoittivat huomattavasti paremmat löydökset (P-arvo chi-neliötestillä: 0,003) seuraavasti: 43 (86%) vs. 41 (82%), 32 (64%) 34 (68%) ja 23 (46%) 35 (70%). Näistä tuloksista on yhteenveto taulukossa 2. Kuviossa 1 esitetään värjäystulokset käyttäen erilaisia kalkinpoistoaineita ja-olosuhteita.

Kuva 1

värjäystulosten demonstrointi käyttämällä erilaisia kalkinpoistoaineita ja-olosuhteita.

4. Keskustelu

madurella mycetomatis-bakteerin aiheuttajan histopatologinen tunnistaminen on vakiintunut, koska se on kultakantaan perustuva menetelmä; kova kudos ja luu vaativat kuitenkin erityistä kalsinointia kudosrakenteen ja aiheuttajan morfologian säilyttämiseksi. Aiheuttajat voidaan tunnistaa käyttämällä hematoksyliini ja eosiini (HE) ja sienten erityisiä tahroja, joten luun vaatii standardi kalsifikaatio protokolla, joka säilyttää kudoksen, aiheuttava aine morfologia, ja tahra kyky. Luun kalkkeutuminen on työläs tekniikka. Se vaatii viikkoja, ja kudoskokoonpanon säilyminen riippuu kalsinoinnin huippuosaamisesta ja nopeudesta. Uudenlainen prosessi, jossa käytettiin mikroaaltouunia, toteutettiin nopeuttamaan kalkinpoistoprosessia . Kalkinpoistoaineen ja-tavan valinta määräytyy periaatteessa menetelmän vakavuudesta, ja mikroaaltoenergian mahdollisia käyttötarkoituksia histologisissa tekniikoissa dokumentoi ensimmäisen kerran Mayers vuonna 1970. Tämän ionisoimattoman päästömenetelmän uskotaan nopeuttavan kalkinpoistoprosessia . Tämän jälkeen molekyylikinetiikka aiheuttaa energiamuutoksen tuotannon, joka kestää kunnes säteily pysähtyy . Tässä tutkimuksessa raportoidut kalsifikaatioajat olivat 29 tuntia, kun EDTA oli 10% (pH 7, 4), kolme tuntia ja seitsemän tuntia, kun EDTA oli 5%, ja viisi tuntia, kun HCl oli 5%, ja kahdeksan tuntia, kun HCl oli 5%. On selvää, että mysetoomainfektiosta kärsivän luukudoksen mikroaaltokalsifikaatiomenetelmä oli huomattavasti nopeampi kuin tavanomainen menetelmä. Lisäksi 5-prosenttisella typpihapolla oli nopeampi kalsinointikyky, jota seurasi 5-prosenttinen suolahappo ja sen jälkeen EDTA (pH 7,4) molemmissa menetelmissä. Pitol ym. käytti koti mikroaaltouuni liesi kalsiumin poistamiseksi rotan luun 8.5% EDTA ratkaisu ja osoitti lasku koeaika 45 päivää tavanomaisessa prosessissa 48 h mikroaaltouuni avustettu prosessi. Tässä työssä 10-prosenttinen EDTA-liuos vei 120 tuntia tavanomaisella menetelmällä ja 29 tuntia mikroaalloilla, jotta mycetoma-infektiosta kärsivä luukudos saatiin täysin kalkittua. EDTA: n pitoisuus kokeessamme oli enemmän kuin Pitol et al.- työhuone. Luun koon, paksuuden ja tyyppien erojen lisäksi nämä voivat olla mahdollisia selityksiä pitolin et al.n tutkimus, joka oli vähentynyt meidän ympäristössä. Lisäksi mycetoomainfektioon sairastuneen luun kalkinpoisto tavanomaisella 5-prosenttista typpihappoa sisältävällä menetelmällä kesti seitsemän tuntia, kun taas mikroaaltouunimenetelmä vei kolme tuntia. Vertailukelpoisia tuloksia saavuttivat Balaton ja Loget . Lisäksi tässä tutkimuksessa kalkinpoistoajat lyhenivät muista tutkimuksista. Tavanomaisissa menetelmissä ilmoitetut kalsifikaatioajat vaihtelivat yhdestä vuorokaudesta ja mikroaaltomenetelmissä neljästä tunnista 5 vuorokauteen, ja niitä pidetään alhaisina verrattuna muihin jyrsijän luulla tehtyihin tutkimuksiin, joissa on raportoitu 2-7 vuorokautta hapolla kalkkeutuvilla liuoksilla ja 10% EDTA: lla (pH 7, 4). Shibata ja hänen ryhmänsä raportoivat lähes samanlaisia kalkinpoistoaikoja, jotka vaihtelivat 1 päivästä 7 päivään 10% HCl: n, 10% typpihapon ja 10% EDTA: n kanssa. He käyttivät kuitenkin happamia kalkinpoistoaineita, joiden pitoisuudet olivat suuremmat . Uma ym. arvioitiin neljän eri kalsifioivan nesteen vaikutuksia käyttämällä mikroaaltokalsifiointia rotan luussa ja raportoitiin 1-1, 5 päivää 5% typpihapon ja 7% HCl/2% EDTA: n suhteen. Kuitenkin 10% EDTA kesti 14-26 päivää tyypin mukaan luun . Näissä tutkimuksissa luun tyyppi, luonne ja koko vaihtelivat ja erosivat tässä analysoiduista. Kalkinpoisto oli keskeinen syy kudososan paremmuuteen ja värjäyksen tarkkuuteen. Philipp ym. (2019) kuvattu, että kalsifikaatiomenetelmä aiheuttaa merkittäviä morfologisia muutoksia, jotka muuttavat proteiinin rakennetta ja vaikuttavat kudoksen värjäyskykyyn . Tutkimuksessamme luuta hoidettiin 5-prosenttisella typpihapolla rutiininomaisella manuaalisella menetelmällä, ja pehmytkudoksessa oli turvotusta sekä ydin-ja sienivärjäyksen häviämistä verrattuna mikroaaltoavusteiseen kalkinpoistoon. Haposta irrottavat aineet häiritsevät yleensä luun ja pehmytkudoksen muuttumattomuutta. Nämä 5% typpihapon erikoistehosteet johtuvat käytetystä ajasta ja liuoksen happamuudesta. Näin ollen nopeampi kalkinpoisto aiheuttaa suuremman vamman ja suuremmat vaikutukset H&E: ssä ja sienitahrassa. Useita sieniä voidaan osoittaa histologisella osiolla käyttämällä histokemiallisia tahroja, kuten Grocottin methenamine-silver (GMS) – tahra ja/tai Gridley (GS) – tahra . Joitakin sieniä voidaan osoittaa tarkasti kudoksessa morfologisten rakenteiden perusteella; tunnistusteho kuitenkin heikkeni pitkäaikaisen kiinnittämisen ja kalsinoinnin jälkeen tavanomaisilla menetelmillä . Tässä tutkimuksessa mikroaaltoavusteinen kalkinpoisto antoi ylivertaisen värjäytymisen verrattuna tavanomaiseen morfologiseen menetelmään, jossa käytettiin H&E: tä ja sieni – erityistä tahraa, jossa 10% EDTA oli ratkaisu, joka parhaiten säilyi kudosrakenteissa ja sienten värjäyskyvyssä huolimatta siitä, että kalkinpoisto kesti kauan.

5. Päätelmät ja suositukset

kalkinpoisto, jota tehostetaan mikroaaltouunin käytöllä, on uusi menetelmä kalkinpoistoon. Tätä tekniikkaa tutkittiin madurella mycetomatis-infektion saaneessa luukudoksessa käyttäen 10% EDTA: ta, 5% typpihappoa ja 5% suolahappoa kalsinoivina nesteinä. Tätä verrattiin tavanomaiseen kalsinointiin huoneenlämpötilassa, jotta voitiin määrittää kalsinoinnin nopeus ja kudoksen morfologia käyttämällä Mayerin hematoksyliini-ja eosiinitahroja luuston rakennetta varten ja Grocott-ja Gridley-tahroja sienimorfologiaa varten. Parempia tuloksia saatiin tavanomaiseen menetelmään verrattuna sekä solujen morfologiassa että sienten itiöemissä ja hyphaessa, jolloin sienten kirkkaus laski huoneenlämpötilassa. Tämä havainto voi auttaa kehittämään sopivia protokollia mycetoma-infektiosta kärsivän luukudoksen analyysejä varten.

6. Nykyisen tutkimuksen rajoitukset

suurempi otoskoko olisi antanut vakuuttavampia tuloksia. Myös kalkinpoistoon käytetyt ajat ovat todennäköisesti erilaiset, jos käytetään muita luun painoja ja luunäytteitä kuin käsiä, sillä kalkinpoistoaika riippuu kovan kudoksen koosta ja rakenteellisesta tiheydestä. Lopuksi, koska olemme käyttäneet kotimaista mikroaaltouunia, lämpötilanoteerauksemme ovat saattaneet olla vain likimääräisiä.

tietojen saatavuus

nykyisen tutkimuksen aikana syntyneet aineistot ovat saatavissa vastaavalta tekijältä kohtuullisesta pyynnöstä.

eettinen hyväksyntä

tämän tutkimuksen hyväksyi Al Neelainin yliopiston lääketieteellisen Laboratorioopin tiedekunnan Institutional Review Board.

eturistiriidat

kirjoittaja ilmoittaa, ettei eturistiriitoja ole.

kiitokset

kirjoittaja haluaa ilmaista vilpittömän kiitollisuutensa Sudanin Khartumin yliopiston Mycetoma Research Centren henkilökunnalle ja erityisen kiitollisuutensa professoreille Ahmed Hassan Fahalille ja patologian emeritusprofessori Ahmed Mohammed El Hassanille heidän avustaan.

lisämateriaalit

tämän tutkimuksen tulosten tueksi käytetyt materiaalit ja reagenssit sisältyvät lisätietoihin. (Lisämateriaalit)