Piparjuuriperoksidaasientsyymit

TEKNISET TIEDOT ja vastaavat tuotteet

natiivi Piparjuuriperoksidaasi

Ekstinktiokerroin: EmM = 100 mitattuna 403 nm: ssä.1

molekyylipaino: (n. 44 kDa)
Sisältää polypeptidiketjun (33 890 Daltonia), hemin plus Ca2+ (n. 700 Daltonia),
ja hiilihydraattia (9400 daltonia).3

Isoelectric Point: isoentsyymit vaihtelevat 3, 0 – 9, 0
ainakin seitsemän HRP: n isootsyymiä on olemassa.2

Piparjuuriperoksidaasi (HRP) on eristetty piparjuuren juurista (Amoracia rusticana) ja kuuluu peroksidaasien ferroprotoporfyriiniryhmään. HRP on yksiketjuinen polypeptidi, joka sisältää neljä disulfidisiltaa. Se on glykoproteiini, joka sisältää 18% hiilihydraattia. Hiilihydraattikoostumus koostuu galaktoosista, arabinoosista, ksyloosista, fukoosista, mannoosista, mannosamiinista ja galaktosamiinista riippuen erityisestä isoentsyymistä.2

Substraattispesifisyys
HRP yhdistyy helposti vetyperoksidiin (H2O2), ja tuloksena oleva kompleksi voi hapettaa monenlaisia kromogeenisia vedyn luovuttajia. Se voi myös käyttää kemiluminesenssisubstraatteja, kuten luminolia ja isoluminolia, ja fluorogeenisia substraatteja, kuten tyramiinia, homovanillihappoa ja 4–hydroksifenyylietikkahappoa.

entsyymin tutkimusmatkailijan Substraattiindeksi tarjoaa yhteyksiä useisiin kromogeenisiin ja kemiluminesoiviin vedyn luovuttajiin, joita käytetään peroksidaasiaktiivisuuden määrittämiseen.

estäjät
seuraavat yhdisteet ovat piparjuuriperoksidaasin estäjiä: natriumatsidi, syanidi, L–kystiini, dikromaatti, etyleenitiourea, hydroksyyliamiini, sulfidi, vanadaatti, P–aminobentsoehappo, Cd+2, Co+2, Cu+2, Fe+3, Mn+2, Ni+2, Pb+2, 4

pH-riippuvuus
pH optimaalinen HRP on välillä 6,0-6,5. Aktiivisuus pH 7,5: ssä on 84% maksimista. Entsyymi on stabiileimmillaan pH-alueella 5,0-9,0.5

Sovellukset
Piparjuuriperoksidaasia käytetään laajalti immunoglobuliinien etikettinä monissa eri immunokemian sovelluksissa, kuten ELISA -, immunoblottaus-ja immunohistokemiassa. HRP: tä voidaan konjugoida vasta-aineiksi useilla eri menetelmillä, kuten glutaarialdehydillä, periodaattihapetuksella, disulfidisidoksilla ja myös amino-ja tioliohjautuvilla risti-inkereillä. HRP on halutuin merkki vasta-aineille, koska se on pienin ja stabiilein kolmesta suosituimmasta entsyymimerkistä (HRP, alkalinen fosfataasi ja B-galaktosidaasi), ja sen glykosylaatio johtaa heikompaan epäspesifiseen sitoutumiseen.6 protokollaa, joissa kuvataan glutaarialdehydi-ja periodaattikonjugaatiomenetelmiä, voidaan tarkastella teoksessa Harlow, E. et al.7

tarjoamme useita kromogeenisia ja kemiluminesenssireagensseja blottaus -, histologia-ja ELISA-sovelluksiin.

tarjoamme myös täydellisen valikoiman HRP: n konjugoituja vasta-aineita.

valmistusohjeet
liuottimen valinta riippuu käyttötarkoituksesta. Jauhemaiset entsyymit ovat liukoista vettä tai 0,1 M fosfaattipuskuria, pH 6 (10 mg/mL). Suspensio (P6140) voidaan laimentaa vedellä.

Säilyvyys / Stabiilisuus
jauhemaiset peroksidaasit tulee säilyttää jääkaapissa 2-8 °C: ssa.Pakastussäilytys on myös hyväksyttävää, mutta sitä ei tarvita. Suspensio (P6140) tulee säilyttää 2-8 °C: ssa.oikein säilytettyinä näiden valmisteiden säilyvyysaika on vähintään kaksi vuotta.

kylmäkuivattujen jauheiden Lämpötilastabiilisuus
liuosten Lämpötilastabiilisuus
liuosten Stabiilisuus vs. pH
liuosten Stabiilisuus vs. pitoisuus

Rz-profiili
RZ (Reinheitszahl): absorbanssisuhde A403/A275. Se mittaa peroksidaasin hemiinipitoisuutta, ei entsyymiaktiivisuutta. Jopa valmisteilla, joilla on korkea RZ-arvo, voi olla alhainen entsymaattinen aktiivisuus. Konjugoiville proteiineille, kuten peroksidaasin vasta-aineille, valitaan peroksidaasi, jonka RZ-arvo on vähintään 3,0.
Spectrophotometric Method to Determine the RZ Value for Peroxidase
Peroxidase Enzymes for Labeling