joillakin mikro-organismeilla on kyky pelkistää rikkiä (rikkiä) sisältäviä yhdisteitä rikkivedyksi metabolian aikana, mitä käytetään yleisesti testimittana niiden tunnistamiseksi laboratorioissa. Mikro-organismien H2S: n tuotannon havaitsemiseen käytetään lukuisia menetelmiä, jotka vaihtelevat rikin lähteen ja H2S: n muodostumisen ilmaisemiseen käytettyjen metallisuolojen mukaan. SIM on H2S: n havaitsemisessa herkempi kuin joko TSI tai KIA, koska se on puoliherkkä, koska siinä ei ole häiritseviä hiilihydraatteja ja koska indikaattorina käytetään peptonoitua rautaa. Lyijyasetaattipaperi on kuitenkin 10 kertaa herkempi kuin muut väliaineet.
tavoitteet
selvittää, pelkistääkö mikrobi rikkipitoisia yhdisteitä sulfideiksi, jolloin syntyy rikkivetykaasua.
periaate
testiaineessa on rautayhdiste ja rikkiyhdiste, joilla testataan rikkivetykaasun tuotantoa. Rikkivetyä syntyy, jos rikkiyhdistettä pelkistää bakteerikanta. Testi siis määrittää, pelkistääkö mikrobi rikkipitoisia yhdisteitä sulfideiksi aineenvaihduntaprosessin aikana. Tietyt bakteerit tuottavat H2S: ää pelkistämällä aminohappoja, kuten kystiiniä, metioniinia, tai pelkistämällä epäorgaanisia rikkiyhdisteitä, kuten tiosulfaatteja, sulfaatteja tai sulfiitteja proteiinin hajoamisen aikana tai anaerobisen hengityksen siirtäessä elektronit rikiksi hapen sijaan. Kummassakin tapauksessa syntyy H2S: ää (rikkivetykaasua), joka reagoi rautayhdisteen kanssa muodostaen rautasulfidin mustan saostuman. Musta väri toimii rikkivedyn esiintymisen indikaattorina. Organismin tuottaman rikkivetykaasun (H2S) osoittaminen. käytetään pääasiassa kyseisen organismin tunnistamiseen.
Media:
tämä testi voidaan suorittaa käyttämällä useita väliaineita, kuten Triple Sugar Iron (TSI), Kligler ’ s Iron Agar (KIA), SIM medium ja Lead Acetate Paper.
- Sulfiittiindolimotiliteetti (SIM-aine) H2S: n havaitsemiseksi
tämä aine sisältää rauta-ammoniumsulfaattia ja natriumtiosulfaattia, jotka yhdessä toimivat rikkivedyn tuotannon indikaattoreina. Vetysulfidin tuotanto voidaan havaita, kun rautasulfidia, mustaa saostumaa, syntyy rauta-ammoniumsulfaatin reagoidessa H2S-kaasun kanssa.
koostumus:
naudan uute 3,0 g Peptonia 30,0 g rauta-ammoniumsulfaattia 0,2 g natriumtiosulfaattia 0,025 g agaria 3,0 g lopullinen pH ( 25°C: ssa) 7,3±0.2 tislattua vettä 1000 ml
- rauta-agaria H2S: n havaitsemiseksi
tämä aine soveltuu enterobakteerien H2S: n tuotannon havaitsemiseen. H2S havaitaan väliaineessa - Lyijyasetaattipaperitesti H2S
havaitsemiseksi, kun tarvitaan herkkä tekniikka H2S-tuotannon havaitsemiseksi, suositellaan lyijyasetaattipaperitestiä.
menettely
I. In sulfiitti-indolimotiliteettiin (SIM) väliaineessa
- Inokuloi eliö merkittyyn putkeen pistokirjoituksella.
- inokuloituja putkia inkuboidaan 37°C: ssa 24-48 tuntia.
- tarkkaile mustan sakan muodostumista väliaineessa.
II. Kligler iron agar (KIA) ja Triple Sugar Iron Agar (TSIA)
- inokuloidaan testiorganismi kiaan ja inkuboidaan sitä sopivassa lämpötilassa yön yli.
- tarkkaile väliaineen mustumista.
III Lyijyasetaattipaperikoe
- inokuloidaan testiorganismilla putki tai pullo steriiliä peptonivettä tai ravinnelientä.
- aseta lyijyasetaattipaperinauha pullon tai putken kaulaan väliaineen yläpuolelle ja tulppa hyvin.
- inokuloitua elatusainetta inkuboidaan 35-37oC: ssa ja tutkitaan päivittäin nauhan alaosan mustumisen varalta.
tulokset
- positiivinen tulos: mustuminen keskipitkällä
- negatiivinen tulos:Ei mustumista väliaineessa
käyttää
- sitä käytetään pääasiassa enterobakteerien suvun jäsenten tunnistamiseen ja satunnaisesti muiden bakteerien, kuten Bacteroidessps: n ja Brucella sps: n erottamiseen.
- testi auttaa tunnistamaan ja erottamaan enterobakteerien jäsenet muista Grambasilleista.
- se on erityisen hyödyllinen Salmonella -, Francisella-ja Proteus-lajien tunnistamisessa.
rajoitukset
- H2S: n tuotanto saattaa estyä YTE: ssä sellaisten organismien osalta, jotka käyttävät sakkaroosia ja estävät H2S: n tuotantoon johtavan entsyymimekanismin.
- lyijyasetaatti on myrkyllistä bakteereille ja saattaa estää joidenkin bakteerien kasvua. Älä anna median koskea nauhaan.
- puhtaasta viljelmästä peräisin oleville pesäkkeille suositellaan biokemiallisia, immunologisia, molekyyli-tai massaspektrometrisiä testejä täydellisen tunnistamisen varmistamiseksi.
- Tille, P. M., & Forbes, B. A. (2014). Bailey & Scott ’ s diagnostic microbiology (kolmastoista painos.). St. Louis, Missouri: Elsevier.
- Cappuccino J. G. ja Sherman N. 2008. Microbiology: a Laboratory Manual, 8th ed. Pearson Benjamin Cummings, San Francisco, CA, Yhdysvallat.
- www.vumicro.com/vumie/help/VUMICRO/Hydrogen_Sulfide_Production_Test.htm
- mic.microbiologyresearch.org/content/journal/micro/10.1099/00221287-8-3-397
- https://microbenotes.com/hydrogen-sulfide-h2s-production-test/
- www.microbiologyresearch.org/docserver/fulltext/micro/8/3/mic-8-3-397.pdf?expires=1543332392&id=id&accname=guest&checksum=C42277C712F05E5951241893FC8EC3F7
- spot.pcc.edu/~jvolpe/b/bi234/lab/differentialMedia/H2Sproduction.html
- https://senthilprabhu.blogspot.com/2017/10/hydrogen-sulphide-h2s-production-test.html
- https://jb.asm.org/content/jb/10/5/439.full.pdf
