Giemsa Stain: Principle, Procedure and Results

Giemsa stain is a type of Romanowsky stain, named after Gustav Giemsa, a German chemist who created a dye solution. Foi projetado principalmente para a demonstração de parasitas da malária em esfregaços de sangue, mas também é utilizado em histologia para exame de rotina de esfregaço de sangue.

utilizações da Mancha de Giemsa

para além da coloração de parasitas da malária, a mancha de Giemsa tem uma variedade de aplicações em Microbiologia e patologia.:

• a coloração de Giemsa é usada para obter contagens diferenciais de glóbulos brancos.
• é também utilizado para diferenciar a morfologia nuclear e citoplasmática das várias células sanguíneas, tais como plaquetas, glóbulos vermelhos, glóbulos brancos.
• em Microbiologia, a mancha de Giemsa é usada para coloração de corpos de inclusão em Chlamydia trachomatis, espécies de Borrelia, e se a mancha de Wayson não está disponível, para Mancha Yersinia pestis. A coloração de Giemsa também é usada para manchar Histoplasma capsulatum, Pneumocystis jiroveci, Klebsiella granulomatis, Penicillium marneffei e, ocasionalmente, cápsulas bacterianas.
• esta mancha é também utilizada na citogenética para manchar os cromossomas e identificar aberrações cromossómicas. É comumente usado para G-banding (Giemsa-Banding)

princípio da coloração de Giemsa

a coloração de Giemsa é uma coloração diferencial e contém uma mistura de Azure, azul de metileno e corante de eosina. É específico para os grupos fosfato de ADN e liga-se a onde existem elevadas quantidades de ligação adenina-timina.

Azure e eosina são Corantes ácidos que mancham variavelmente os componentes básicos das células, como o citoplasma, grânulos, etc.

o azul de metileno actua como Corante Básico, que mancha os componentes ácidos, especialmente o núcleo da célula.

metanol actua como fixativo, bem como como a mancha celular. O fixador não permite qualquer alteração adicional nas células e fá-las aderir à lâmina de vidro. A coloração de Giemsa pode ser preparada em casa utilizando o pó de coloração de Giemsa ou pode ser obtida comercialmente. Os ingredientes básicos de ambos são os mesmos; no entanto, diluições podem ser feitas dependendo do uso.

PROCEDIMENTO

A. Para a preparação da mancha:

1. Pesar a quantidade necessária de pó mancha, e a transferência para um ambiente limpo, seco 1litre capacidade de garrafa. Adicionar metanol e misturar bem.
2. medir e adicionar glicerol e misturar bem.
3. colocar a garrafa de mancha em banho-maria a 50-60 ° C ou a 37°C até 2 horas, com mistura frequente.Rótulo do frasco e conservar num local fresco e escuro com uma rolha firme.

Nota: Se a água entra em contato durante qualquer fase de preparação da mancha, a mancha fica estragada, portanto, usar, vidro seco e armazenar em condições onde não haveria contato com água.

• filtrar a mancha utilizando o papel de filtragem Whatman n. o 1 e diluir com água tamponada para pH 7.2, de modo a tornar as soluções de trabalho

B. Para as lâminas de coloração

o método de coloração, concentração e tempo de coloração utilizado varia de acordo com o objectivo, por exemplo, os esfregaços de sangue finos utilizam uma diluição de matéria-prima 1:20, enquanto que para o esfregaço de sangue grosso utiliza-se uma diluição de 1:50.

esfregaço de sangue de Forquina

1. fixar a película SecA Ao ar em metanol absoluto mergulhando a película brevemente (duas doses) num frasco de Coplin contendo metanol absoluto.
2. retirar e deixar secar o ar.
3. mancha com mancha de Giemsa diluída (1: 20, vol / vol) durante 20 minutos (para 1:20 diluição, adicionar 2 ml de Giemsa-mãe a 40 ml de água tamponada num frasco de Coplin).
4. lavar mergulhando brevemente a lâmina para dentro e para fora de um frasco de Coplin de água tamponada (uma ou duas vezes). Nota: a lavagem excessiva descolorizará o filme.
5. deixar o ar secar em posição vertical. Observar ao microscópio primeiro a 40X e depois usar lentes de imersão em óleo

para esfregaços de sangue

1. deixar a película secar ao ar completamente durante várias horas ou durante a noite. Não secar as películas em uma incubadora ou pelo calor, porque isso vai consertar o sangue e interferir com a lisagem das hemácias.
   Nota: Se for necessário um diagnóstico rápido da malária, as películas grossas podem ser tornadas ligeiramente mais finas do que o habitual, podendo secar durante 1 hora, e depois manchadas.
2. NÃO FIXAR.
3. mancha com mancha de Giemsa diluída (1:50, vol/vol) durante 50 minutos (para uma diluição de 1:50, adicionar 1 ml de Giemsa-mãe a 50 ml de água tamponada num frasco de Coplin)
4. lavar colocando a película em água tamponada durante 3 a 5 minutos.
5. Deixe secar em uma posição vertical e observar ao microscópio primeiro em 40X e, em seguida, com o uso de óleo de imersão lente

Para Chlamydia trachomatis

Siga as etapas acima mencionadas, mas com a diluir a mancha de 1:40 de diluição (adicionar 0,5 ml de stock Giemsa solução para 19,5 ml de buffer de água) e deixar a mancha de 90 a 120 minutos.

observação:

em observação microscópica, organelas celulares, bactérias e parasitas distinguem-se com base na sua morfologia e cor;