A Guide to Koi Herpesvirus Disease: How to Detect, Treat and Prevent

Il primo caso riconosciuto di KHV si è verificato nel Regno Unito nel 1996 (Haenen et al. 2004). Da allora altri casi sono stati confermati in quasi tutti i paesi che la cultura koi e / o carpa comune con l’eccezione dell’Australia (Hedrick et al. 2000; Haenen et al. 2004, Pokorova et al. 2005). Questa scheda informativa ha lo scopo di informare veterinari, biologi, produttori di pesce e hobbisti sulla malattia di KHV.

Che cos’è KHV?

Figura 1. Koi con branchie screziate e occhi infossati a causa della malattia da herpesvirus koi.

L’herpesvirus Koi (noto anche come Cyprinid herpesvirus 3; CyHV3) è classificato come un virus a DNA a doppio filamento appartenente alla famiglia Alloherpesviridae (che comprende gli herpesvirus dei pesci). Il lavoro di Waltzek e colleghi (Waltzek et al. 2005, 2009) ha rivelato che il KHV è effettivamente un herpesvirus, basato sulla morfologia e la genetica del virus, ed è strettamente correlato al virus del vaiolo delle carpe (Cyprinid herpesvirus 1; CyHV1) e al virus della necrosi ematopoietica del pesce rosso (Cyprinid herpesvirus 2; CyHV2). La malattia da herpesvirus delle Koi è stata diagnosticata nelle koi e nelle carpe comuni (Hedrick et al. 2000; OATA 2001). Altri ciprinidi (ad esempio, pesci rossi; Carassius auratus e carpe erbivore; Ctenopharyngodon idella) e specie non ciprinidi sono tipicamente inalterati da KHV, sebbene il DNA di KHV sia stato rilevato nei tessuti di pesci rossi e altre specie ittiche esposte al virus utilizzando metodi di prova della reazione a catena della polimerasi (PCR) (El-Matbouli et al. 2007, Sadler et al. 2008, Bergmann et al. 2009, Kempter et al. 2009). Pesce rosso ibrido (pesce rosso maschio C. auratus x carpa comune femmina C. carpio) erano moderatamente resistenti alla mortalità a seguito di infezione sperimentale con KHV (Hedrick et al. 2006). Se la carpa comune ibrida, altri ciprinidi o specie non ciprinidi possono ospitare KHV e in seguito trasmettere la malattia a varietà di carpe comuni naïve rimane controversa.

La malattia da herpesvirus Koi (KHVD) colpisce pesci di varie età, spesso con conseguente mortalità dell ‘ 80-100% nelle popolazioni sensibili quando le temperature dell’acqua sono comprese tra 60° e 77°F (16° e 25 °C) (Haenen et al. 2004). Tuttavia, come con altre infezioni herpesvirali, il KHV può rimanere nel pesce infetto per tutta la vita; pertanto, i pesci che si riprendono da un’epidemia di KHV dovrebbero essere considerati portatori del virus (Petty e Fraser 2005, St. Hilaire et al. 2005, Eide et al. 2011).

Quali sono i segni di KHV?

I segni clinici di KHV sono spesso non specifici. La mortalità può iniziare molto rapidamente nelle popolazioni infette, con decessi che iniziano entro 24-48 ore dopo la comparsa iniziale dei segni clinici. Negli studi sperimentali, l ‘ 82 per cento dei pesci esposti al virus ad una temperatura dell’acqua di 72°F (22°C) è morto entro i primi 15 giorni (Ronen et al. 2003). L’infezione da KHV può produrre gravi lesioni branchiali che presentano come chiazze branchiali con macchie rosse e bianche (Figura 1) (può essere simile ai segni della malattia di columnaris; Pubblicazione SRAC #479b sulla malattia di Columnaris). Le macchie bianche sono dovute alla necrosi (morte) del tessuto branchiale. Le lesioni branchiali causate dalla malattia di KHV sono i segni clinici più comuni nelle koi colpite. Altri segni esterni di KHV possono includere branchie sanguinanti, occhi infossati e macchie pallide sulla pelle. Alcune koi infette da KHV possono avere un naso dentellato (Goodwin 2012). In alcuni casi, le infezioni batteriche e parassitarie secondarie possono essere il problema più ovvio, mascherando il danno causato dall’infezione virale primaria. L’esame microscopico delle biopsie branchiali rivela spesso un alto numero di batteri e vari parassiti (Hedrick et al. 2000; Haenen et al. 2004).

I segni interni di KHVD sono variabili e non specifici, ma possono includere aderenze superiori al normale nella cavità corporea e ingrossamento e/o aspetto screziato degli organi interni (Hedrick et al. 2000; Haenen et al 2004).

A livello comportamentale, i pesci colpiti rimangono spesso in superficie, nuotano letargicamente e possono presentare difficoltà respiratorie e nuoto non coordinato.

Come si infettano i pesci con KHV?

I metodi di diffusione (trasmissione) di KHV includono il contatto diretto con pesci infetti, il contatto con fluidi provenienti da pesci infetti; e il contatto con acqua, fango o altri fomiti / vettori che sono venuti a contatto con sistemi contaminati. Il virus infettivo entra principalmente nei pesci sensibili attraverso la pelle, incluso il tessuto branchiale (Costes et al. 2009). A seconda della temperatura dell’acqua, i pesci sensibili esposti al KHV possono essere infettati, sviluppare malattie e morire; oppure possono sopravvivere allo scoppio iniziale della malattia e diventare portatori del virus (Petty e Fraser 2005, St. Hilaire et al. 2005, Eide et al. 2011). I pesci che sopravvivono all’esposizione a KHV o ricevono il vaccino KHV possono diventare immunizzati e sviluppare un livello di protezione contro il virus, sebbene la durata della protezione rimanga sconosciuta (Ronen et al. 2003, Perelberg et al. 2008). I sopravvissuti alle epidemie di KHV possono diventare portatori del virus e possono essere in grado di diffondere la malattia ai pesci sensibili. Questi pesci portatori potrebbero non mostrare segni di infezione da KHV sebbene possano trasportare e/o spargere il virus.

In che modo la temperatura dell’acqua influisce sulla malattia di KHV?

I focolai della malattia di KHV (KHVD) si verificano tipicamente in primavera e in autunno quando le temperature dell’acqua sono comprese tra 60° e 77°F (16° e 25 °C) con un periodo di incubazione di 7-21 giorni a seconda della temperatura dell’acqua (Haenen et al. 2004). KHVD a temperature fino a 60 ° F (15,5-16°C) è stato riportato in focolai di carpe comuni in Giappone, e studi sperimentali hanno dimostrato che il virus può indurre mortalità fino a circa 82°F (28°C). Le temperature dell’acqua più calde inducono più rapidamente la malattia clinica rispetto ai pesci tenuti a temperature più basse. A temperature dell’acqua più basse (ad es., 55°F), il virus può infettare i pesci senza indurre segni clinici di malattia, ma quando si verificano nuovamente temperature dell’acqua permissive, i pesci mostrano segni tipici di KHV e possono morire (Gilad et al. 2003, St. Hilaire et al. 2005).

Come faccio a sapere se i miei pesci hanno KHV?

La diagnosi positiva di KHV richiede l’assistenza di un veterinario o di uno specialista della salute dei pesci e di un laboratorio diagnostico della malattia dei pesci. L’identificazione diagnostica del KHV può essere effettuata con diversi metodi diretti e indiretti. I metodi diretti sono procedure che rilevano virus effettivi o” pezzi ” di virus. I metodi indiretti sono procedure che determinano se un pesce ha montato una risposta immunitaria contro KHV dopo l’esposizione al virus misurando i livelli di anticorpi anti-KHV nel sangue (Adkison et al. 2005, St-Hilaire et al. 2005, 2009).

I metodi diretti utilizzati per identificare il KHV includono: 1) isolamento e identificazione del virus (cioè, crescita del virus) utilizzando una linea cellulare suscettibile come la linea cellulare Koi Fin (KF-1) {crescita ottimale osservata a temperature comprese tra 59° e 77°F (15° e 25°C)} e 2) tecniche PCR (cioè, test per la presenza di DNA KHV). Per questi test diagnostici diretti, i tessuti vengono rimossi dai pesci che vengono raccolti vivi poi eutanasia. L’isolamento e il rilevamento del virus nei tessuti da pesci morti per più di poche ore possono essere inaffidabili. Test diagnostici diretti non letali sono disponibili su campioni come sangue, materiale fecale, muco e clip branchiali (cioè biopsie), ma questi test possono produrre risultati meno definitivi o meno accurati. Un test di coltura cellulare positivo indica un’infezione attiva e in corso con KHV. Il rilevamento positivo del DNA KHV mediante PCR indica che il virus è presente, quindi può essere utilizzato per confermare la malattia di KHV nei pesci clinicamente malati e forse anche per identificare i portatori (Eide et al. 2011).

Un metodo di prova indiretto per KHV che è stato ampiamente utilizzato è il saggio immunoassorbente legato all’enzima (ELISA). L’ELISA KHV utilizza un campione di sangue e, quindi, è uno strumento diagnostico non letale. I dati ELISA possono fornire la prova che un pesce sta attualmente montando, o ha precedentemente montato, una risposta immunitaria (cioè, produzione di anticorpi) contro KHV. Un test ELISA positivo per KHV indica che il pesce ha prodotto anticorpi contro KHV dopo una precedente esposizione al virus. Tuttavia, le cellule immunitarie che producono anticorpi richiedono tempo per attivarsi e, nel tempo, se un pesce non è più malato, la produzione di anticorpi anti-KHV può rallentare o fermarsi. Pertanto, ELISA potrebbe non essere in grado di rilevare anticorpi contro KHV se l’infezione si è verificata anni prima o se il pesce non ha ancora avuto il tempo di produrre anticorpi.

I risultati negativi di test diretti o indiretti non significano necessariamente che i pesci non siano portatori. Non v’è alcun test che rileva definitivamente tutti i vettori o sopravvissuti.

Esiste un trattamento per KHV?

Non esiste alcun trattamento per KHV. I farmaci antivirali non sono disponibili per trattare KHV o altre malattie virali dei pesci coltivati. Gli studi hanno dimostrato che le koi possono sopravvivere a un focolaio di KHV se le temperature dell’acqua sono aumentate a 86°F (30°C) durante l’epidemia (Ronen et al. 2003). Tuttavia, questa tecnica aumenta solo marginalmente i tassi di sopravvivenza e aumentare artificialmente le temperature dell’acqua sopra gli 80°F nelle strutture di detenzione può causare un aumento dell’insorgenza di altre malattie batteriche e parassitarie più comuni. Le alte temperature dell’acqua non sono generalmente raccomandate per l’allevamento di routine e la gestione di koi e carpe comuni. Inoltre, e ancora più importante, le koi che sopravvivono a un’epidemia di KHV o quelle esposte a temperature elevate dell’acqua possono diventare portatori del virus. Queste koi portatrici sono una fonte della malattia per i pesci sensibili quando le condizioni sono appropriate per lo spargimento e l’infezione virale. A causa della precedente esposizione e immunizzazione al virus, i pesci portatori in genere non soccombono alla malattia di KHV o mostrano segni di infezione clinica.

Recentemente, l’USDA APHIS ha approvato l’uso di un vaccino vivo attenuato per la prevenzione del KHVD, da somministrare a carpe comuni o koi più pesanti di 100 grammi (il vaccino non è approvato per l’uso in riproduttori). Il vaccino, originariamente sviluppato da un gruppo di ricerca israeliano (Ronen et al. 2003), genera alti titoli anticorpali anti-KHV e protegge la carpa comune vaccinata o le koi dopo la successiva sfida virale (Ronen et al. 2003, Perelberg et al. 2008). Tuttavia, sono state sollevate preoccupazioni per quanto riguarda l’efficacia del vaccino e la durata della protezione concessa ai pesci vaccinati. Attualmente, non è noto se i pesci vaccinati diventino portatori del ceppo vaccinale o se siano protetti contro l’infezione da parte del ceppo wild-type che rappresenterebbe una minaccia per la carpa comune non vaccinata. Un’altra sfida per quanto riguarda il vaccino è che non sono disponibili in commercio test diagnostici in grado di differenziare i pesci vaccinati rispetto a quelli naturalmente infetti/esposti.

Poiché le epidemie di KHV hanno causato grandi perdite nelle strutture di koi e carpe comuni e poiché vi è la preoccupazione che i sopravvissuti siano portatori, chiunque con koi a cui è stata diagnosticata la KHV dovrebbe considerare lo spopolamento (eliminando l’intera popolazione) come opzione logica. Tutti i materiali e i sistemi che i pesci infetti hanno contattato devono essere puliti e disinfettati.

Le particelle virali nell’acqua ambientale possono rimanere infettive fino a tre giorni (Shimizu et al. 2006). Tuttavia, protocolli di disinfezione comuni (vedi sotto) possono essere utilizzati per eliminare il virus dai sistemi e dalle apparecchiature idriche. Anche i biofiltri e i mezzi di biofiltro esposti al virus devono essere accuratamente puliti e disinfettati. Prima della disinfezione, l’apparecchiatura deve essere pulita da detriti o accumuli organici, poiché questi possono ridurre l’efficacia del disinfettante. Soluzioni di cloro (ad esempio, candeggina per uso domestico) possono essere utilizzate per disinfettare apparecchiature o sistemi di grandi dimensioni senza pesce. Il protocollo raccomandato per il cloro è di 200 ppm (200 mg/L) per un’ora (Noga 1996). Il corretto dosaggio di questo principio attivo dipende dal tipo di cloro utilizzato. Per la candeggina domestica, che è 5.25 per cento ipoclorito di sodio per litro, 35 millilitri per gallone di acqua darà 200 mg/L concentrazione finale.

I composti di ammonio quaternario (QACs) possono essere utilizzati anche per sistemi e apparecchiature. I composti di ammonio quaternario sono più delicati sulle reti rispetto alle soluzioni di cloro. La concentrazione QAC raccomandata per la disinfezione è di 500 ppm (500 mg/L) per un’ora (Noga 1996). Il corretto dosaggio di QACs dipende dal tipo / concentrazione nella miscela utilizzata, poiché le concentrazioni variano a seconda del prodotto utilizzato. Diversi prodotti QAC possono variare dal 10 per cento al 50 per cento principio attivo. Ad esempio, Roccal-D Plus® (Pharmacia & Upjohn Company, Pfizer) è circa il 24 per cento di principio attivo; pertanto, una concentrazione di trattamento finale di 500 mg/L richiederebbe circa 7,9 ml di Roccal-D Plus® per gallone di acqua. Risciacquare abbondantemente dopo l’uso di qualsiasi tipo di disinfettante per eliminare il disinfettante residuo che può uccidere i pesci.

Come si può prevenire il KHV?

Prima di ottenere qualsiasi pesce, chiedere prima al fornitore se ci sono state gravi perdite inspiegabili nella popolazione. Il monitoraggio e il test per KHV possono essere eseguiti da test di laboratorio, quindi chiedi ai fornitori se sono stati effettuati test per KHV e richiedi una copia della documentazione dei risultati di laboratorio. Il modo migliore per prevenire KHV è conoscere i tuoi fornitori di pesce e avere un buon rapporto di lavoro con loro.

La quarantena (cioè la separazione dalle altre koi) è il metodo più affidabile per evitare l’introduzione di agenti patogeni in uno stagno o in una struttura. Per attuare una procedura di quarantena efficace, tutti i nuovi pesci devono essere tenuti in un sistema separato, idealmente in un edificio o area diversa dal pesce residente. I pesci residenti devono essere nutriti, maneggiati e mantenuti prima del nuovo pesce. I pesci in quarantena richiedono attrezzature dedicate come reti, secchi e tubi a sifone che vengono utilizzati solo per loro. Inoltre, pediluvi e lavaggi a mano dovrebbero essere utilizzati da chiunque entri e esca dall’area di quarantena. Il pesce deve essere messo in quarantena per un minimo di 30 giorni. Specificamente per KHV, nuovo koi dovrebbe essere messo in quarantena in acqua che è 75°F (24°C) per almeno 30 giorni. Al termine del periodo di quarantena, qualsiasi pesce malato deve essere esaminato da un veterinario e/o da un laboratorio diagnostico per escludere KHV o altre malattie. Se tutti i pesci appaiono sani, i campioni di sangue devono essere raccolti da questi pesci in quarantena e presentati per il rilevamento di anticorpi utilizzando ELISA. (Atkinson et al. 2005; St. Hilaire et al. 2009)

Gli hobbisti di koi sono incoraggiati a promuovere l’uso di spettacoli di koi in stile inglese, che mantengono diverse fonti (proprietari) di koi separate durante lo spettacolo e il giudizio. Inoltre, reti separate, tubi a sifone e altre attrezzature dovrebbero essere utilizzate da tutti i partecipanti allo spettacolo per i propri pesci. Lo stile giapponese di spettacolo, in cui koi da diversi proprietari sono collocati insieme nella stessa vasca, può provocare la diffusione della malattia tra i pesci sensibili. Indipendentemente dallo stile di spettacolo, il pesce che ritorna dagli spettacoli deve essere messo in quarantena per un minimo di 30 giorni e tenuto a 75°F prima di essere rimesso nella popolazione generale. Per una maggiore sicurezza, il test degli anticorpi per il prelievo di sangue può essere utile. I sopravvissuti (pesci che sono stati precedentemente esposti alla malattia di KHV) non dovrebbero mai essere portati a uno spettacolo di koi.

Alla fine del periodo di quarantena e prima di mettere insieme tutti i pesci, collocare diverse nuove koi con diverse koi della popolazione stabilita in un’area separata, lontana dal resto della popolazione stabilita e osservarle alla ricerca di segni di malattia. Questo “test” può aiutare a determinare con un numero minore di pesci se mettere insieme le due popolazioni dopo la quarantena potrebbe causare problemi. Sfortunatamente, non ci sono garanzie.

Chi devo contattare se sospetto che il mio pesce abbia KHV o se voglio maggiori informazioni?

Commerciali di pesce produttori, grossisti e dettaglianti, in Florida, può contattare uno dei seguenti Università della Florida Malattia di Pesce di Diagnostica di Laboratorio*:

Nel nord della Florida:

Thomas B. Waltzek
Fauna selvatica e Acquatica Veterinario Malattia di Laboratorio (WAVDL)
Acquatici British
Università della Florida
Bldg. 471, 2173 Mowry Strada
Gainesville, Florida 32611
(352) 273-5202
E-mail: [email protected]

In Florida del Sud:

Roy P. E. Yanong o Deborah Pouder
Laboratorio di acquacoltura tropicale
Laboratorio diagnostico della malattia dei pesci
Università della Florida
1408 24th St. SE 33570
Ruskin, Florida
(813) 671-5230
http://tal.ifas.ufl.edu

*Nota: questi laboratori accettano solo casi di produttori commerciali di pesce, grossisti e rivenditori.

Hobbisti e proprietari personali di koi pond (o produttori commerciali di pesce, grossisti e rivenditori al di fuori della Florida) possono cercare un veterinario acquatico o un laboratorio diagnostico acquatico nella loro area sul sito Web AquaVetMed (http://www.aquavetmed.info) o http://www.myveterinarian.com/avma/vclPublic/#.

Quali sono le considerazioni normative associate a KHV?

A partire dal gennaio 2007, KHV è stato aggiunto all’Organizzazione Mondiale per la salute animale (OIE; www.oie.int) elenco delle malattie per i pesci. A causa di questo elenco il Dipartimento dell’Agricoltura degli Stati Uniti Animal and Plant Health Inspection Service (USDA APHIS) chiede che i veterinari accreditati e laboratori diagnostici riportano casi positivi di KHV all’area veterinary-in-charge (AVIC) dello stato in cui il pesce ha avuto origine. Tuttavia, non verranno richieste informazioni sul cliente (ad esempio, nome, indirizzo). Queste informazioni aiuteranno l’USDA a determinare quale sia la prevalenza di KHV negli Stati Uniti. USDA APHIS non ha requisiti sanitari di importazione specifici per KHV per koi o altri pesci in movimento interstatale o internazionale. Non esiste uno spopolamento obbligatorio per le popolazioni di koi infette da KHV. Spetta al proprietario di quegli animali e al loro veterinario decidere quale corso seguire.

Allevatori di Koi, commercianti, espositori e veterinari devono essere a conoscenza delle norme sanitarie internazionali sulle esportazioni riguardanti il movimento di pesci vaccinati con KHV. I requisiti di importazione per alcuni paesi specificano che non sarà consentito l’ingresso di pesci vaccinati con KHV. Si prega di controllare il sito web APHIS per i requisiti sanitari statali e internazionali (elencati rispettivamente): http://www.aphis.usda.gov/animal_health/animal_dis_spec/aquaculture/aquastates.shtml

http://www.aphis.usda.gov/regulations/vs/iregs/animals/

Oppure contattare l’ufficio locale USDA APHIS VS Area per assistenza (http://www.aphis.usda.gov/animal_health/area_offices/).

Gli umani possono ottenere KHV?

Non vi è alcuna preoccupazione zoonotica con KHV. L’herpesvirus responsabile della causa della malattia di KHV nei pesci non causerà malattie negli esseri umani.

In che modo KHV differisce da altre malattie virali?

È importante differenziare il KHV da altri virus che possono causare malattie nelle carpe e nelle koi. Altre due importanti malattie virali riconosciute nella carpa sono la viremia primaverile della carpa (SVC) e il vaiolo della carpa (Cyprinid herpesvirus 1; CyHV1). Queste malattie hanno implicazioni gestionali e normative significativamente diverse (Tabella 1). Sia KHV che SVC sono ora elencati come malattie dei pesci soggette a notifica dall’OIE. Tuttavia, all’interno degli Stati Uniti, la SVC è considerata una malattia ittica straniera o esotica (non presente) di specie sensibili acquaculturate e, in quanto tale, il veterinario o il laboratorio accreditato è tenuto a notificare focolai confermati ai funzionari dei servizi veterinari dell’USDA APHIS che, a loro volta, notificheranno l’OIE. In confronto, KHV è considerato diffuso negli Stati Uniti. L’USDA APHIS chiede ai veterinari e ai laboratori accreditati di segnalare casi di KHV all’area veterinary-in-charge (AVIC) dello stato in cui si sta verificando l’epidemia. Le informazioni aiuteranno l’USDA a determinare quale sia la vera prevalenza di KHV negli Stati Uniti Tuttavia, ogni focolaio di KHV non verrà notificato all’OIE.

La viremia primaverile della malattia delle carpe è causata da un virus RNA a filamento singolo, il Rhabdovirus carpio, ed è stata segnalata in carpe e koi comuni (C. carpio), carpe erbacee (C. idella), carpe bighead (Aristichthys nobilis), carpe argentate (Hypophthalmichthys molitrix), carassi carassi (Carassius carassius) e pesci rossi comuni (C. auratus). Per ulteriori informazioni su SVC vedere la Tabella 1 e la scheda informativa UF/IFAS “Viremia primaverile delle carpe” (VM-142).

La malattia del vaiolo della carpa (Cyprinid herpesvirus 1; CyHV1) è causata da un herpesvirus diverso dal KHV (Herpesvirus cyprini) che ha un’ampia distribuzione geografica e colpisce la carpa comune e le koi. Il vaiolo della carpa causa tipicamente escrescenze sollevate lisce (“masse simili a verruche”) sulla pelle e sulle pinne dei pesci più anziani, ma può essere associato ad alta mortalità negli avannotti di età inferiore a due mesi (Sano et al. 1990). Il vaiolo della carpa non è una malattia segnalabile o notificabile negli Stati Uniti Le temperature dell’acqua superiori a 68° F (20°C) aiutano a ridurre le escrescenze della pelle e delle pinne sui pesci più vecchi, ma non eliminano il virus dal pesce (Tabella 1). Nei pesci maturi, il vaiolo della carpa è tipicamente una malattia non letale e autolimitante (cioè, la maggior parte se non tutte le crescite si risolveranno a temperature più calde da sole).

Sommario

Koi herpesvirus malattia è una malattia devastante ornamentali koi e carpa comune. Esistono diversi metodi per rilevare vari stati dell’infezione. Non esiste un trattamento efficace per liberare il pesce dal virus. Buone pratiche di gestione, tra cui quarantena, test e allevamento appropriato, sono componenti vitali per prevenire questa malattia per tutti i produttori di koi e carpe comuni, rivenditori e hobbisti.

Agosto 2013