Informazioni tecniche e prodotti correlati
Caratteristiche del prodotto per la perossidasi di rafano nativo
Coefficiente di estinzione: EmM = 100 se misurato a 403 nm.1
Peso molecolare: (ca. 44 kDa)
Include la catena polipeptidica (33,890 Daltons), hemin più Ca2 + (ca. 700 Dalton),
e carboidrati (9400 Dalton).3
Punto isoelettrico: gli isoenzimi vanno da 3.0-9.0
Esistono almeno sette isoenzimi di HRP.2
La perossidasi di rafano (HRP) è isolata dalle radici di rafano (Amoracia rusticana) e appartiene al gruppo ferroprotoporfirina delle perossidasi. HRP è un polipeptide a catena singola contenente quattro ponti disolfuro. È una glicoproteina contenente il 18% di carboidrati. La composizione di carboidrati è costituita da galattosio, arabinosio, xilosio, fucosio, mannosio, mannosamina e galattosamina, a seconda dell’isozima specifico.2
Specificità del substrato
HRP si combina prontamente con perossido di idrogeno (H2O2) e il complesso risultante può ossidare un’ampia varietà di donatori di idrogeno cromogenico. Può anche utilizzare substrati chemiluminescenti come luminolo e isoluminolo e substrati fluorogenici come tiramina, acido omovanillic e acido 4–idrossifenilacetico.
L’indice del substrato dell’esploratore degli enzimi fornisce i collegamenti a parecchi donatori cromogenici e chemiluminescenti dell’idrogeno usati per analizzare l’attività della perossidasi.
Inibitori
I seguenti composti sono inibitori della perossidasi di rafano: azoturo di sodio, cianuro, L–cistina, bicromato di ethylenethiourea, idrossilammina, solfuro di vanadato, p–amminobenzoico, Cd+2, Co+2 Cu+2 Fe+3, Mn+2, Ni+2, Pb+2.4
Dipendenza dal pH
Il pH ottimale di HRP è nella gamma da 6.0 a 6.5. L’attività a pH 7,5 è dell ‘ 84% del massimo. L’enzima è più stabile nell’intervallo di pH da 5,0 a 9,0.5
Applicazioni
La perossidasi di rafano è ampiamente utilizzata come etichetta per le immunoglobuline in molte diverse applicazioni di immunochimica, tra cui ELISA, immunoblotting e immunoistochimica. L’HRP può essere coniugato agli anticorpi con diversi metodi, tra cui la glutaraldeide, l’ossidazione del periodato, attraverso legami disolfuro e anche attraverso inchiostri incrociati diretti da amino e tiolo. HRP è l’etichetta più desiderata per gli anticorpi poiché è il più piccolo e più stabile delle tre etichette enzimatiche più popolari (HRP, fosfatasi alcalina e B-galattosidasi) e la sua glicosilazione porta a ridurre il legame non specifico.I protocolli 6 che descrivono le metodologie di coniugazione della glutaraldeide e del periodo possono essere rivisti in Harlow, E. et al.7
Offriamo diversi reagenti cromogenici e chemiluminescenti per applicazioni di blotting, istologia ed ELISA.
Offriamo anche una linea completa di anticorpi coniugati HRP.
Istruzioni per la preparazione
La scelta del solvente dipenderà dall’applicazione prevista. Gli enzimi in polvere sono acqua solubile o tampone fosfato 0,1 M, pH 6 (10 mg/mL). La sospensione (P6140) può essere diluita in acqua.
Conservazione / Stabilità
Le perossidasi in polvere devono essere refrigerate a 2-8 °C. Anche lo stoccaggio in freezer è accettabile ma non richiesto. La sospensione (P6140) deve essere conservata a 2-8 °C. Se correttamente conservata, questi prodotti hanno una durata di almeno due anni.
Stabilità della temperatura delle polveri liofilizzate
Stabilità della temperatura delle soluzioni
Stabilità delle soluzioni rispetto al pH
Stabilità delle soluzioni rispetto alla concentrazione
Profilo RZ
RZ (Reinheitszahl): il rapporto di assorbanza A403/A275. È una misura del contenuto di emina della perossidasi, non dell’attività enzimatica. Anche i preparati con un alto valore di RZ possono avere una bassa attività enzimatica. Per coniugare proteine come gli anticorpi contro la perossidasi, scegliere una perossidasi con un valore RZ di almeno 3,0.
Spectrophotometric Method to Determine the RZ Value for Peroxidase
Peroxidase Enzymes for Labeling
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