Alcuni microrganismi hanno la capacità di ridurre i composti contenenti zolfo (zolfo) all’idrogeno solforato durante il metabolismo che viene comunemente impiegato come misura di prova per la loro identificazione nei laboratori. Numerosi metodi sono utilizzati per rilevare la produzione di H2S da parte di microrganismi che variano con la fonte di zolfo e i sali metallici utilizzati per indicare la formazione di H2S. SIM è più sensibile nel rilevamento di H2S rispetto a TSI o KIA, a causa della sua natura semisolida, della sua mancanza di carboidrati interferenti e dell’uso di ferro peptonizzato come indicatore. Tuttavia, la carta acetato di piombo è 10 volte più sensibile rispetto ad altri supporti.
Obiettivi
Determinare se il microbo riduce i composti contenenti zolfo a solfuri per produrre gas di idrogeno solforato.
Principio
Un composto di ferro e un composto di zolfo sono inclusi nel mezzo di prova per testare la produzione di gas di idrogeno solforato. L’idrogeno solforato viene prodotto se il composto di zolfo viene ridotto dal ceppo batterico. Questo test determina quindi se il microbo riduce i composti contenenti zolfo ai solfuri durante il processo di metabolismo. H2S è prodotto da alcuni batteri attraverso la riduzione di aminoacidi contenenti zolfo come cistina, metionina o attraverso la riduzione di composti inorganici di zolfo come tiosolfati, solfati o solfiti durante la degradazione delle proteine o quando la respirazione anaerobica trasporta gli elettroni allo zolfo anziché all’ossigeno. In entrambi i casi viene prodotto H2S (idrogeno solforato) che reagisce con il composto di ferro per formare il precipitato nero del solfuro ferrico. Il colore nero funge da indicatore per la presenza di idrogeno solforato. La rilevazione di idrogeno solforato (H2S) gas prodotto da un organismo. è usato principalmente per aiutare nell’identificazione di quel particolare organismo.
Supporto:
Questo test può essere eseguito con l’uso di diversi supporti tra cui Triple Sugar Iron (TSI), Kligler’s Iron Agar (KIA), SIM medium e Lead Acetate Paper.
- Solfito indolo motilità (SIM) mezzo per rilevare H2S
Questo mezzo contiene solfato di ammonio ferroso e tiosolfato di sodio, che poi insieme servono come indicatori per la produzione di idrogeno solforato. La produzione di idrogeno solforato può essere rilevata quando il solfuro ferroso, un precipitato nero, viene prodotto come risultato della reazione del solfato di ammonio ferroso con il gas H2S.
Composizione:
Estratto di manzo 3,0 g Peptone 30,0 g Solfato di ammonio ferroso 0,2 g Tiosolfato di sodio 0,025 g Agar 3,0 g pH finale (a 25°C) 7,3±0.2 Acqua distillata 1000ml
- Agar di ferro per rilevare H2S
Questo mezzo è adatto per rilevare la produzione di H2S da enterobatteri. H2S viene rilevato dal citrato ferrico contenuto nel mezzo - Test di carta acetato di piombo per rilevare H2S
Quando è richiesta una tecnica sensibile per rilevare la produzione di H2S, si consiglia il test di carta acetato di piombo.
Procedura
I. Nel mezzo di motilità di indolo del solfito (SIM)
- Inoculare l’organismo nel tubo marcato per mezzo di inoculazione della pugnalata.
- Incubare le provette inoculate a 37°C per 24-48 ore.
- Osservare per la formazione di precipitato nero sul mezzo.
II. In agar di ferro Kligler (KIA) e Agar di ferro triplo zucchero (TSIA)
- Inoculare l’organismo di prova in KIA e incubarlo a temperatura appropriata durante la notte.
- Osservare per annerire il mezzo.
III. Test di carta acetato di piombo
- Inoculare un tubo o una bottiglia di acqua peptonica sterile o brodo nutriente con l’organismo di prova.
- Inserire una striscia di carta di acetato di piombo nel collo del flacone o del tubo sopra il supporto e tappare bene.
- Incubare il mezzo inoculato a 35-37oC ed esaminare giornalmente per un annerimento della parte inferiore della striscia.
Risultati
- Risultato positivo: Annerimento sul mezzo
- Risultato negativo:Nessun annerimento sul mezzo
Usi
- Viene utilizzato principalmente per aiutare nell’identificazione dei membri della famiglia Enterobacteriaceae e occasionalmente per differenziare altri batteri come Bacteroidessps e Brucella sps.
- Il test aiuta nell’identificazione e differenziazione dei membri delle Enterobacteriaceae (enterici) da altri Gram – bacilli.
- È particolarmente utile per identificare le specie di Salmonella, Francisella e Proteus.
Limitazioni
- La produzione di H2S può essere inibita dalla STI per gli organismi che utilizzano il saccarosio e sopprimono il meccanismo enzimatico che provoca la produzione di H2S.
- L’acetato di piombo è tossico per i batteri e può inibire la crescita di alcuni batteri. Non consentire ai supporti di toccare la striscia.
- Si raccomanda di eseguire test biochimici, immunologici, molecolari o di spettrometria di massa su colonie provenienti da colture pure per una completa identificazione.
- Tille, P. M., & Forbes, B. A. (2014). Bailey & Microbiologia diagnostica di Scott (Tredicesima edizione.). St. Louis, Missouri: Elsevier.
- Cappuccino J. G. e Sherman N. 2008. Microbiologia: Manuale di laboratorio, 8a ed. Pearson Benjamin Cummings, San Francisco, CA, Stati Uniti d’America.
- www.vumicro.com/vumie/help/VUMICRO/Hydrogen_Sulfide_Production_Test.htm
- mic.microbiologyresearch.org/content/journal/micro/10.1099/00221287-8-3-397
- https://microbenotes.com/hydrogen-sulfide-h2s-production-test/
- www.microbiologyresearch.org/docserver/fulltext/micro/8/3/mic-8-3-397.pdf?expires=1543332392&id=id&accname=guest&checksum=C42277C712F05E5951241893FC8EC3F7
- spot.pcc.edu/~jvolpe/b/bi234/lab/differentialMedia/H2Sproduction.html
- https://senthilprabhu.blogspot.com/2017/10/hydrogen-sulphide-h2s-production-test.html
- https://jb.asm.org/content/jb/10/5/439.full.pdf
