김사 얼룩은 염료 용액을 만든 독일 화학자 구스타프 김사의 이름을 딴 로마노프스키 얼룩의 한 유형입니다. 그것은 혈액 얼룩에 있는 말라리아 기생충의 논증을 위해 1 차적으로 디자인되었습니다,그러나 또한 혈액 얼룩의 일상적인 검사를 위한 조직학에서 채택됩니다.
김사 얼룩의 용도
말라리아 기생충을 염색하는 것 외에도 김사 얼룩은 미생물학 및 병리학에서 다양한 응용 분야를 가지고 있습니다:
- 김사 얼룩은 차등 백혈구 수를 얻는 데 사용됩니다.
- 또한 혈소판,적혈구,백혈구와 같은 다양한 혈액 세포의 핵 및 세포질 형태를 분화하는 데 사용됩니다.
- 미생물학에서 김사 얼룩은 클라미디아 트라코마티스,보렐리아 종에서 봉입체를 염색하는 데 사용되며,웨이슨의 얼룩이 없는 경우 예르시니아 페스티스를 염색하는 데 사용됩니다. 김사 얼룩은 또한 히스 토 플라스마 캡슐 라툼,뉴모 시스 지로 베치,클렙시 엘라 그랠 로마 티스,페니 실륨 마르 네페이 및 때때로 박테리아 캡슐을 염색하는 데 사용됩니다.
- 이 얼룩은 또한 염색체를 염색하고 염색체 이상을 확인하기 위해 세포 유전학에 사용됩니다. 일반적으로 지 밴딩(김사 밴딩)에 사용됩니다)
김사 얼룩의 원리
김사 얼룩은 차등 얼룩이며 하늘색,메틸렌 블루 및 에오신 염료의 혼합물을 포함합니다. 그것은 아데닌 티민 접합의 다량이 있는 곳에 유전자 및 무관의 인산염 그룹을 위해 특정적입니다.
하늘빛과 에오신은 세포질,과립 등과 같은 세포의 기본 성분을 가변적으로 얼룩지게하는 산성 염료입니다.
메틸렌 블루는 산성 성분,특히 세포의 핵을 얼룩지게하는 염기성 염료 역할을합니다.
메탄올은 세포 얼룩뿐만 아니라 정착액으로 작용합니다. 정착액은 세포안에 어떤 더 변화를 허용하지 않으며 유리제 활주에 고착하.
김사 얼룩의 조성물
김사 얼룩은 김사 얼룩 분말을 사용하여 집에서 제조하거나 상업적으로 수득할 수 있다. 둘 다의 기본적인 성분은 동일하다;그러나,희석은 사용에 따라서 할 수 있다.
| 성분 | |
| 김사 분말 | 7.6 |
| 글리세롤 | 500 미리리터 |
| 메탄올 | 500 미리리터 |
절차
가.사내 얼룩 제조용:
- 필요한 양의 분말 얼룩의 무게를 측정하고 깨끗하고 건조한 1 리터 용량의 병에 옮깁니다. 메탄올을 넣고 잘 섞는다.
- 글리세롤을 측정하고 첨가하고 잘 섞는다.
- 물 목욕에 있는 얼룩의 병을 50-60 의 씨 또는 37 의 씨에 빈번한 섞기를 가진 2 까지 시간 동안 두십시오.
- 병에 라벨을 붙이고 굳은 마개가 있는 서늘하고 어두운 곳에 보관하십시오.
참고:물 얼룩의 준비의 어떤 단계 동안 접촉에 면 얼룩 되 면 버 릇,따라서 사용,건조 유리 및 물 접촉이 없을 것 이라고 조건에 저장.
- 왓 만 필터 페이퍼 1 호를 사용하여 얼룩을 걸러 내고 물 7.2 로 버퍼링 된 물로 희석하여 작업 용액을 만듭니다.
염색 슬라이드의 경우
염색,사용 된 얼룩의 농도 및 타이밍에 대한 방법은 목적에 따라 다르며,예를 들어 얇은 혈액 도말은 스톡의 1:20 희석을 사용하는 반면 두꺼운 혈액 도말의 경우 1:50 희석이 사용됩니다.
- 공기 건조 필름을 절대 메탄올을 포함하는 코플린 병에 필름을 간단히 담그면 절대 메탄올에 고정시킨다.
- 제거하고 공기를 말리십시오.
- 희석 된 김사 얼룩(1:20,권/권)으로 20 분 동안 얼룩(1 용:20 희석,코플린 병에 완충 된 물 40 밀리리터에 스톡 김사 2 밀리리터를 첨가하십시오).
- 완충된 물(한두 딥)의 코플린 병 안팎으로 슬라이드를 간단히 담그면 씻는다.
참고:과도한 세척은 필름을 탈색합니다. - 수직 위치에서 공기를 건조 시키십시오. 현미경으로 40 배에서 먼저 관찰 한 다음 오일 침지 렌즈를 사용하여 관찰하십시오.
두꺼운 혈액 얼룩
- 필름이 몇 시간 또는 밤새 공기 건조되도록하십시오. 인큐베이터 또는 열에 의해 필름을 건조하지 마십시오,이 혈액을 수정하고 적혈구의 용해를 방해하기 때문에.
참고:말라리아의 신속한 진단이 필요한 경우 두꺼운 필름을 평소보다 약간 얇게 만들고 1 시간 동안 건조시킨 다음 염색 할 수 있습니다. - 수정하지 마십시오.
- 희석된 김사 얼룩(1:50,권/권)을 50 분 동안(1:50 희석을 위해,코플린 병에 1 밀리리터의 스톡 김사를 50 밀리리터의 완충수에 첨가)
- 물기를 완충된 물 속에 3 내지 5 분 동안 넣어 세척한다.
- 수직 위치에서 공기를 건조시키고 현미경으로 먼저 40 배 관찰 한 다음 오일 침지 렌즈를 사용하여 클라미디아 트라코마 티스
상기 단계를 따르되 1:40 희석(0.5 밀리리터 스톡 김사 용액을 19.5 밀리리터 완충 물)의 희석 얼룩으로 90-120 분 동안 얼룩을 남겨 둡니다.
관찰:
현미경 관찰에서 세포 소기관,박테리아 및 기생충은 형태와 색에 따라 구별됩니다.;
세포 성분 염색 후 관찰된 색 레드 블러드 연보라 핑크 호중구 분홍색 세포질이있는 붉은 보라색 핵 호산구 자주색 핵,희미하게 분홍색 세포질 및 적색에서 주황색 과립. 호염기구 보라색 핵,파란색 거친 과립. 림프구 밝은 파란색 세포질이있는 진한 파란색 핵. 단핵구 자주색 핵이있는 분홍색 세포질. 혈소판 보라색~보라색 과립. 숙주 세포의 핵 진한 보라색 핵의 어두운 보라색 숙주 세포의 세포질 옅은 파란색 백세포의 세포질 옅은 파란색 또는 회색 파란색 멜라닌 과립 블랙 그린 박테리아 창백하거나 진한 파란색 클리 마디아 트라코마 티스 봉입체 발달 단계에 따라 푸른 자주색에서 진한 보라색 보렐리아 스피로체테스 자줏빛 보라색 예르시니나 페스티스 코코 바실러스 어두운 염색 끝이있는 파란색(양극성 염색) 말라리아 기생충 말라리아 기생충은 빨간색 또는 분홍색 핵과 파란색 세포질을 가지고 있습니다. 만약 피.비박스가 보인다면,슈피프너 점들은 적혈구의 세포질에서 분홍색의 점들의 짝수 카펫으로 보입니다. 만약 팔시파룸이 관찰된다면,마우어 갈라진 틈은 적혈구 세포질에 고르지 않게 분포된 거친 몸체로 보일 것이다.
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