10.4.2 포유류 세포의 냉동 보존을위한 트레할로오스
냉동 보존은 일반적으로 매우 낮은 온도에서 오랜 기간 동안 세포의 보존에 사용되어왔다. 그러나 동결 및 해동 중에 발생하는 물리적 변화는 세포 생존 및 기능에 해로울 수 있습니다. 따라서 냉동 보호제는 냉동 보존 중에 세포에 추가되어야합니다. 세포에 대한 냉동 보호제로서의 트레할로스의 사용은 세포가 더 오랜 기간 동안 보존되기 위해 세포막의 양쪽에서 폴리 하이드 록시 화합물이 필요하다는 개념으로부터 나타났다. 트레할로오스는 각종 인간 세포의 냉동 보존을 위한 보호제로 몇몇 그룹에 의해 탐구되었습니다.
비티 외. 열성 액체 상전이를 사용하여 췌장 랑게르한스 세포에 트레 할로 오스를 도입했습니다. 트레할로스를 사용한 냉동 보존은 성인 섬의 92%회복을 가져 왔으며,비경구증 단독을 사용한 58%의 회복에 비해. 14 배 더 많은 인슐린이 트레 할로 오스 없는 것보다 트레 할로 오스로 냉동 보존 된 섬에서 이식편에서 발견되었습니다. 트레 할로 오스로 냉동 보존 된 인간 태아 섬 유사 세포 클러스터의 회복은 94%였는데,트레할로오스가없는 사람들의 경우 42%에 불과했습니다. 누드 마우스에 이식 할 때,트레 할로 오스와 함께 냉동 보존 된 이식편의 인슐린 함량이 15 배 증가한 것이 관찰되었습니다. 이 결과는 냉동 보존제로서의 트레할로스의 첨가가 인간 췌장 내분비 조직의 매우 높은 생존율을 초래한다는 것을 나타낸다.
토너와 동료들은 유전자 조작 버전의 기공 형성 단백질 알파-헤 몰리 신을 사용하여 포유류 세포에 저농도의 트레할로스를 도입했으며,세포 내 트레할로스가 냉동 보존 동안 이들 세포의 생존을 크게 향상시킬 수 있음을 발견했다. 냉동 보존 된 마우스 섬유 아세포와 인간 각질 세포의 장기 해동 후 생존율은 세포 내 트레 할로 오스 농도에서 각각 80%와 70%였다. 세포내 트레할로오스에는 또한 건조한 포유류 세포의 막 완전성에 대한 유리한 효력이 있기 위하여,본래 원형질막의 90%회복이 몇 주 동안 온화한 조건 하에서 세포를 말리고 저장하기에 관찰된 상태에서 있었습니다.
인간 간세포의 냉동 보존에 대한 트레할로스의 효과는 카텐츠 등에 의해 조사되었다. . 간세포는 배양기에서 10%,트레할로스 0.2%로 냉동되어 해빙 후 세포 생존력과 도금 효율이 현저히 개선된 것으로 나타났다. 냉동 보존 동안 트레 할로 오스의 존재는 또한 부착 된 세포에서 총 단백질 수준이 증가하고,해동 후 알부민 분비 수준이 높아지고 아스파 테이트 아미노 전이 효소 수준이 낮아졌다.
줄기 세포는 조혈 조사,새로운 치료 전략 개발 및 특정 질병에 대한 모델 시스템에 중요한 도구입니다. 냉동 보존의 발전에도 불구 하 고 해동 후 세포 죽음 주요 문제가 남아 있다. 마르티네티 외. 정상적인 냉동 보존 과정에서 발생하는 세포 손실을 방지하기 위해 말초 혈액에서 순수한 조혈 줄기 및 전구 세포를 냉동 보존하기 위해 트레할로스를 사용했습니다. 본 발명의 실시예에 의하면,본 발명의 실시예에 의하면,본 발명의 실시예에 의하면,본 발명의 실시예에 의하면,본 발명의 실시예에 의하면,본 발명의 실시예에 의하면,본 발명의 실시예에 의하면,본 발명의 실시예에 의하면,본 발명의 실시예에 의하면,본 발명의 실시예에 의하면,본 발명의 실시예에 의하면,본 발명의 실시예에 의하면,본 발명의 실시예에 의하면,본 발명의 실시예에 의하면,본 발명의 실시예에 의하면, 또한,더 짧고 더 긴 기간 동안 트레할로스를 이용한 냉동 보존은 해동 후 거대 세포 세포로 분화 할 수있는 능력을 유지했다. 이 결과는 냉동 보호제로 사용될 때 줄기 세포의 생존력과 기능을 유지하는 트레할로스의 능력을 시사합니다.
적혈구(적혈구)및 혈소판의 장기 저장 생존 능력의 높은 수준을 유지 하는 동안 수혈 및 임상 의학에 중요 한 의미를 하고있다. 사트파시 외. 삼투 불균형 40 밀리미터의 세포내 트레 할로 오스 농도 결과 인지질 상 전이를 사용 하 여 세포 외 매체에서 트레 할로 오스와 적 적 환을 로드 하는 방법을 설명 합니다. 트레할로스는 더 긴 기간 동안 적혈구의 삼투 보호를 발휘하기 위하여 찾아냈습니다. 재수화에 선행된 트레할로스 적재한 적혈구의 동결 건조는 그들의 형태학의 보유를 가진 55%생존 귀착되었습니다. 그 결과,메트헤모글로빈의 농도가 낮았고,그 결과 메트헤모글로빈의 농도가 낮아졌다. 잔디와 카탈라아제의 활성 및 동결 건조 된 적혈구에서 헤모글로빈의 보조 구조는 모두 신선한 적혈구의 것과 매우 유사했다. 이 연구는 트 레 할 로스 로드 헤모글로빈의 안정화에 대 한 필요 하 고 적혈구의 냉동 보존을 향해 중요 한 단계를 제공 하는 것을 보여 주었다.
혈액 은행에 있는 인간 혈소판의 정상적인 저장 시간은 수혈을 위해 요구된 혈소판의 만성 부족의 결과로 버려지는 5 일입니다. 더 긴 기간 동안 혈소판의 냉동 보존을 향한 노력으로,울커 등. 인간 혈소판의 세포질에 트레 할로 오스를 도입하는 방법을 설명했다. 트레 할로 오스는 50%이상의 로딩 효율로 37%의 인간 혈소판에 의해 쉽게 흡수되는 것으로 밝혀졌습니다. 트레할로스 적재한 혈소판의 동결 건조 그리고 재수화 작용은 85%의 생존율을 가진 본래 혈소판의 우수한 회복 귀착되었습니다. 이 혈소판은 트롬빈,콜라겐 및 리스토세틴과 같은 작용제에 대해 신선한 혈소판에 거의 동일한 방식으로 반응했습니다. 트레 할로 오스-적재 된 혈소판의 막 마이크로 도메인 및 단백질 성분은 동결 건조 및 재수 화 후에 그대로 유지되었다.
트레 할로 오스의 보호 효과는 또한 각막 상피 세포에서 입증되었다. 건조 후 트레 할로 오스와 배양 된 각 막 상피 세포의 사전 주입 제어 매체에 비해 죽은 세포의 비율에 상당한 감소 결과. 보호 효과는 또한 핵 돼지 눈에서 생체 외로 확인되었으며,여기서 트레할로스로 배양 된 조직은 눈에 띄게 매끄러 웠습니다. 이 결과는 안과에 있는 트레 할로 오스의 공용품과 안구 건조 증후군을 위한 점안액으로 그것의 잠재적인 신청을 나타냅니다.
소기관의 냉동 보존을 위한 트레할로스의 사용은 야마구치 등에 의해 입증되었다.,냉동 미토콘드리아의 냉동 보호제로 트레할로스를 사용한 사람. 트레 할로 오스의 존재 하에서 냉동 된 미토콘드리아 전시 미토콘드리아 외부 막(엄마)무결성 및 신선한 미토콘드리아의 것과 유사한 가족 단백질에 대한 반응성. 또한 트레할로스의 존재하에 보존되었다. 이것은 수시로 새기 쉬운 되는 미토콘드리아를 얼기를 위해 이용된 표준 자당 만니톨 완충기와는 다른 입니다. 따라서 트레 할로 오스는 미토콘드리아의 생물학적 특징의 대부분을 유지할 수 있었고 트레 할로 오스-냉동 미토콘드리아는 세포 사멸 및 엄마 무결성에 의존하는 다른 미토콘드리아 기능에 대한 연구에 사용될 수 있습니다.
트레할로스는 장기간에 걸쳐 장기 보존을 위해 사용되어 왔다. “동부 표준시-교토 솔루션”내 피 세포와 혈관의 성능에 영향을 주지 않고>30 시간에 대 한 개 폐의 보존에 대 한 세계 반 도핑기구의 그룹에 의해 개발 되었다. 트레 할로 오스를 사용하여 백신 및 항체의 장기간 안정화 및 보존도 달성되었습니다.
