간략한 소개:블로 팅 기술
블로 팅은 단백질 및 핵산의 식별을 위해 분자 생물학에서 사용되며 진단 목적으로 널리 사용됩니다. 이 기술은 니트로 셀룰로오스 막 또는 나일론 인 지지체에 관심있는 분자를 고정시킵니다. 그것은 특정 핵산 및 유전자의 식별을 위해 혼성화 기술을 사용합니다.
블로 팅 기술은 유전자 발현의 다른 단계 동안 생체 분자의 식별에 사용 되는 도구입니다. 단백질 합성은 각각의 단백질을 생산하기 위해 변환됩니다 유전자 세그먼트의 발현을 포함한다.
북부,서부&남부와 같은 블로 팅의 아형은 찾는 표적 분자에 의존한다. 서던 블로 팅 기술을 사용하여 도말 할 수 있습니다. 유전자 발현 동안,유전자가 단백질 생산을 위해 유전자로 표현 될 때,이 과정은 노던 블로 팅에 의해 식별 될 수 있습니다. 마지막으로,코딩 된 미르나는 관련 단백질을 생성하며,이 단백질 식별은 웨스턴 블로 팅에 의해 수행 될 수 있습니다.
- 블로 팅을위한 일반 절차 샘플을 균질화하십시오.
- 전기영동 막에 의한 관심 분자의 분리.
- 분자를 니트로 셀룰로오스 막/나일론 막으로 옮긴다.
- 분자의 혼성화 또는 식별
노던 블로 팅
노던 블로 팅은 유전자 발현의 연구에 사용되는 기술이다. 그것은 특정 발견에 의해 수행됩니다. 일반적으로 전체 유전자 시퀀스의 5%로 표시됩니다. 이 방법은 특정 유전자의 정체성,수,활동 및 크기를 나타냅니다. 이 블로 팅 기술은 조직 또는 유기체의 성장에도 사용될 수 있습니다. 분화 및 형태 형성의 여러 단계에서 풍부한 아르 자형 유전자 변화 그리고 이것은이 기술을 사용하여 식별 할 수 있습니다. 그것은 또한 분자 수준에 이상하고,병에 걸리거나 감염한 상태의 식별에서 원조합니다. 노던 블롯 기술은 1977 년 제임스 알 와인,데이비드 켐프 과 조지 스탠포드 대학에서 냄새. 이 기술은 남부 블로 팅과 프로세스의 유사성으로 인해 그 이름을 얻었습니다. 이 두 기술의 가장 큰 차이점은 노던 블로 팅은 루닌에 대해서만 우려한다는 것입니다.
원리
모든 정상적인 블로 팅 기술로서,노던 블로 팅은 전기 영동으로 시작하여 크기별로 샘플을 분리합니다. 전기 이동법은 핵산의 책임에 근거를 둔 핵 분자 분자를 분리합니다. 핵산의 전하는핵산 서열의 크기에 비례한다. 따라서 전기 영동 막은 핵산 서열의 크기에 따라 핵산 서열을 분리합니다. 우리의 표적 서열이 폴리()-꼬리를 특징으로 올리고셀룰로오스 크로마토그래피 기술을 통해 샘플을 분리할 수 있습니다. 겔 분자는 본질적으로 깨지기 쉽기 때문에 분리 된 서열은 나일론 막으로 옮겨집니다. 나일론 막의 선택은 핵산이 성격안에 부정적으로 위탁된다 고 요인에 공헌된다. 공유 결합에 의해 고정화된다. 그런 다음 프로브를 추가하면 프로브가 보완 될 수 있습니다. 포름아미드는 어닐링 온도를 감소시키기 때문에 일반적으로 블로 팅 버퍼로 사용됩니다.
절차
- 수집된 조직 또는 배양 샘플을 먼저 균질화한다. 샘플은 비교를 위해 다른 유형의 문화를 대표 할 수도 있고 문화 내부의 다른 성장 단계를 연구 할 수도 있습니다.
- 전기영동 유닛에서 분리된 아르자니나 서열은 핵산 분리를 목적으로 아가로오스 겔을 사용한다.
- 이제 분리된 아르자닌 시퀀스가 나일론 막으로 전달된다. 이것은 두 가지 메커니즘 모세관 작용과 이온 상호 작용에 의해 수행됩니다.
- 이송 작업은 겔을 다음 순서로 유지하여 수행됩니다. 먼저,아가로오스 겔을 스택의 바닥에 놓은 다음 블로 팅 막을 놓습니다. 이 종이 타월 위에 가벼운 무게(유리판)가 놓여 있습니다. 전체 설정은 전송 버퍼를 포함하는 비커에 보관됩니다.
- 고정 나일론 멤브레인은 프로브와 혼합됩니다. 그러나 생물 과학과 같은 다른 분야에 대한 어플리케이션도 있습니다..
- 오점 막을 세척하여 원하지 않는 프로브
- 표지된 프로브를 화학 발광 또는 자동 방사선 촬영에 의해 검출한다. 결과는 엑스레이 영화에 있는 어두운 악대일 것입니다.
겔 및 프로브
포름알데히드를 변성제로서 사용하는 아가로오스 겔을 사용하여 샘플을 분리하지만,작은 아르자나나 또는 마이크로 아르자나나 서열에서는,변성제로서 우레아를 갖는 폴리아크릴아미드 서열을 또한 사용할 수 있다. 에 티듐 브로마이드는 염색 제로 사용할 수 있습니다. 두 가지 유형의 마커는 크기 표시 용입니다. ㅏ 아르 자형 유전자 사다리 과 리보솜 하위 단위 아르 자형 유전자 서열의 크기를 식별하는 데 사용됩니다.
프로브는 전체 또는 일부를 보완할 수 있다. 이 경우,상기 제제들은 상기 제제들에 대해 상기 제제들에 의해 생성된다. 인비보 프로브는 엄격한 세척으로 인해 변성될 수 있습니다. 화학 발광의 경우 프로브에 방사성 동위 원소,알칼리성 포스파타제 또는 양 고추 냉이 퍼 옥시다아제가 표시되어 있습니다.
