Sliding clamps zijn te vinden in alle domeinen van het leven en zijn essentieel voor efficiënte DNA-replicatie, die nodig is elke keer een cel deelt, evenals voor het coördineren van het verkeer op DNA. De Escherichia coli (E. coli) bètaklem is een ringvormig eiwit dat bestaat uit twee identieke monomeren gecodeerd door het dnan-gen dat associeert met DNA-polymerase III en de hoge mate van processiviteit vergemakkelijkt die nodig is voor DNA-replicatie. De glijdende klemproteã nen openen en worden geladen op specifieke structuren van DNA door klemladers in aanwezigheid van ATP. We streven ernaar om inzicht te krijgen in de bijdragen van verschillende domeinen aan de functie van beta met behulp van een linked‐beta‐clamp die de homodimer beperkt tot een van de twee interfaces. Gewoonlijk staat de homo‐dimere structuur van de BÃ ta‐klem het toe om als moleculaire hulpmiddelriem te handelen, die meer dan één proteã ne gelijktijdig bij specifieke eiwitinteractieplaatsen op de klem binden. Aldus, zal een beter begrip van de rol van de glijdende klemmen in het proces van de schadetolerantie van DNA worden verzameld door te onderzoeken of één interface of bindende plaats voor de lading van DNA of voor andere eiwitinteractie adequaat is. Om deze constructie te maken, werden de linker lengte en volgorde, evenals expressiecondities, geoptimaliseerd. De gekoppelde-bèta-proteã nen werden gekenmerkt door een thermische denaturatieanalyse, en toonden vergelijkbare thermische stabiliteit aan wild‐type bèta. In een ATPase-analyse werden vergelijkbare hoeveelheden anorganisch fosfaat gedetecteerd in reacties die ofwel gekoppeld‐bèta of wild‐type bèta bevatten, wat erop wijst dat de klemlader met beide versies van de bètaklem kan interageren. Momenteel onderzoeken we of gekoppelde en wild‐type beta de processiviteit van een polymerase in een primer extension assay verbeteren. We construeren en karakteriseren nu varianten van wild-type beta en linked-beta om het belang van residuen te testen op slechts één van de interfaces of partner eiwitbindingsplaatsen.
