Giemsa-vlek: Principe, Procedure en resultaten

Giemsa-vlek is een type romanowsky-vlek, vernoemd naar Gustav Giemsa, een Duitse chemicus die een kleurstofoplossing creëerde. Het werd voornamelijk ontworpen voor het aantonen van malariaparasieten in bloeduitstrijkjes, maar het wordt ook gebruikt in de histologie voor routineonderzoek van bloeduitstrijkjes.

gebruik van Giemsa-kleuring

naast kleuring van malariaparasieten heeft Giemsa-kleuring een verscheidenheid aan toepassingen in de Microbiologie en pathologie:

• Giemsa-kleuring wordt gebruikt om differentiële aantallen witte bloedcellen te verkrijgen.
• het wordt ook gebruikt om de nucleaire en cytoplasmatische morfologie van de verschillende bloedcellen zoals bloedplaatjes, RBC ‘s, WBC’ s te differentiëren.
• in de microbiologie wordt Giemsa-vlek gebruikt voor het kleuren van inclusie-organismen in Chlamydia trachomatis, Borrelia-soorten, en als Wayson-vlek niet beschikbaar is, voor het kleuren van Yersinia pestis. Giemsa-vlek wordt ook gebruikt om Histoplasma capsulatum, Pneumocystis jiroveci, Klebsiella granulomatis, Penicillium marneffei en soms bacteriële capsules te bevlekken.
• deze vlek wordt ook gebruikt in cytogenetica om de chromosomen te bevlekken en chromosomale afwijkingen te identificeren. Het wordt vaak gebruikt voor G-banding (Giemsa-Banding)

principe van Giemsa-vlek

Giemsa-vlek is een differentiële vlek en bevat een mengsel van azuurblauw, methyleenblauw en eosine-kleurstof. Het is specifiek voor de fosfaatgroepen van DNA en hecht zich aan waar er hoge hoeveelheden adenine-thymine binding zijn.

Azure en eosine zijn zure kleurstoffen die de basisbestanddelen van de cellen, zoals het cytoplasma, korrels enz., variabel beitsen.

methyleenblauw is de basiskleurstof die de zure bestanddelen, met name de celkern, verkleurt.

Methanol werkt zowel als fixatief als als cellulaire vlek. Het fixeermiddel staat geen verdere verandering in de cellen toe en zorgt ervoor dat ze zich aan de glasplaat hechten.

samenstelling van Giemsa-vlek

Giemsa-vlek kan in huis worden bereid met Giemsa-vlekpoeder of kan commercieel worden verkregen. De basisingrediënten van beide zijn hetzelfde; echter, verdunningen kunnen worden gemaakt afhankelijk van het gebruik.

PROCEDURE

A. Voor de In-house voorbereiding van de vlek:

1. Weeg de benodigde hoeveelheid poeder vlek, en transfer naar een schone, droge 1litre capaciteit van de fles. Voeg methanol toe en meng goed.
2. meet en voeg glycerol toe en meng goed.
3. plaats de fles vlek in het waterbad bij 50-60°C of bij 37°C gedurende maximaal 2 uur met frequente menging.
4. Label de fles en bewaar op een koele, donkere plaats met een stevige stop.

opmerking: als water in contact komt tijdens elke stap van de bereiding van de vlek, de vlek wordt bedorven, daarom gebruik, droog glaswerk en bewaar in omstandigheden waar er geen water contact zou zijn.

• filtreer de vlek met Whatman filterpapier nr. 1 en verdun met water gebufferd tot pH 7.2 om werkoplossingen

B te maken. Voor kleurglaasjes

varieert de gebruikte methode voor kleuring, concentratie en timing van de vlek afhankelijk van het doel, bijvoorbeeld:dunne bloeduitstrijkjes gebruiken verdunning 1:20 van de stam, terwijl voor dikke bloeduitstrijkjes verdunning 1: 50 wordt gebruikt.

ForThin bloeduitstrijkje

1. fixeer luchtgedroogde film in absolute methanol door de film kort te dompelen (twee dips) in een coplinpot met absolute methanol.
2. verwijderen en aan de lucht laten drogen.
3. vlek met verdunde Giemsa-vlek (1: 20, vol/vol) gedurende 20 min (Voor a 1:Verdunning, voeg 2 ml bouillon Giemsa toe aan 40 ml gebufferd water in een Coplin pot).
4. wassen door het glaasje kort in en uit een koplinpotje met gebufferd water te dompelen (een of twee dips).
   opmerking: overmatig wassen zal de film ontkleuren.
5. verticaal aan de lucht laten drogen. Observeer eerst onder de microscoop bij 40X en vervolgens met behulp van een olie-immersielens

met kleine bloeduitstrijkjes

1. laat de film gedurende enkele uren of gedurende een nacht grondig aan de lucht drogen. Droog geen films in een incubator of door warmte, omdat dit het bloed fixeert en de lysing van de RBC ‘ s verstoort.
   opmerking: als een snelle diagnose van malaria nodig is, kunnen dikke films iets dunner dan normaal worden gemaakt, 1 uur laten drogen en daarna gekleurd worden.
2. NIET OPLOSSEN.
3. vlek met verdunde Giemsa vlek (1: 50, vol / vol) gedurende 50 min (voeg bij een 1:50 verdunning 1 ml bouillon Giemsa toe aan 50 ml gebufferd water in een Coplin pot)
4. was door de film gedurende 3 tot 5 min in gebufferd water te plaatsen.
5. laat verticaal aan de lucht drogen en observeer eerst onder de microscoop bij 40X en vervolgens met behulp van een olie-immersielens

voor Chlamydia trachomatis

Volg de bovengenoemde stappen, maar met de verdunde vlek van 1:40 verdunning (voeg 0,5 ml bouillonoplossing toe aan 19,5 ml gebufferd water) en laat de vlek 90-120 minuten staan.

observatie:

bij microscopische observatie worden celorganellen, bacteriën en parasieten onderscheiden op basis van hun morfologie en kleur.;