vitamine D en omega-3 vetzuursupplementen bij kinderen met autismespectrumstoornis: een onderzoeksprotocol voor een facultaire gerandomiseerde, dubbelblinde, placebogecontroleerde studie

deze studie bestaat uit twee fasen: Fase 1 omvat rekrutering en screening, terwijl fase 2 een vitamine D en n-3 lcpufa gerandomiseerde, dubbelblinde, placebogecontroleerde studie is (Fig. 1). De duur van de interventie is 12 maanden.

schematisch schema van de studieopzet. 1blood biomarkers: 25-hydroxyvitamine D (25 (OH)D), rode bloedcellen (RBC) vetzuren, calcium, albumine, ijzerstudies, vitamine B12, folaat, volledig bloedbeeld en vitamine A. vragenlijsten: sociodemografie, medische geschiedenis, eet – /eetgedrag en voedseldagboek. 2 vragen: sociocommunicatief functioneren, zintuiglijke problemen en afwijkend gedrag (primaire uitkomsten); gastro-intestinale symptomen( secundaire uitkomst), blootstelling aan de zon en huidskleur. Antropometrie: gewicht en lengte. 3blood biomarkers: 25 (OH)D, RBC vetzuren, calcium en albumine. Vragenlijsten: sociocommunicatief functioneren, zintuiglijke problemen, afwijkend gedrag (primaire uitkomsten) en eet – /eetgedrag en voedingskwaliteit. Antropometrie: gewicht en lengte. 4blood biomarkers: 25 (OH)D, calcium en albumine. * Gastro-intestinale symptomen (secundaire uitkomst) en medicatie / supplement gebruik/incidentie van bijwerkingen/supplement compliance zal worden gecontroleerd gedurende de gehele studie periode

Fase 1 biedt de mogelijkheid voor een uitgebreide beschrijving van de studiepopulatie met betrekking tot de voedingsstatus (biochemische indices en voedingsopname), demografie en medische geschiedenis. Fase 2 zal de werkzaamheid aantonen van suppletie met vitamine D, n-3 LCPUFAs of beide op het verminderen van ASD symptomen.

deelnemers

deze studie is een samenwerking tussen Massey University en de Waitemata District Health Board (WDHB), Nieuw-Zeeland. Verzorgers van kinderen die voldoen aan de criteria voor de studie zullen in eerste instantie worden benaderd door de Wdhb Ontwikkelingscoördinatoren.

we berekenden dat 42 deelnemers (Minimaal 34 deelnemers, en rekening houdend met een potentiële uitval van 20%) nodig zouden zijn voor elke groep van de studie om een klinisch significant verschil aan te tonen bij 80% vermogen en 5% statistische significantie. Vermogensberekeningen waren gebaseerd op een verschil van 17 eenheden tussen groepen met een supplement en placebo in verandering vanaf baseline tot eindpunt op de totale score van de sociale Responsiviteitsschaal (SRS), op een gemiddelde SRS en standaardafwijking van respectievelijk 105 en 24,7 eenheden bij onbehandelde kinderen met ASD (uit onze pilotstudie van 2015, niet gepubliceerd). De steekproefomvang werd berekend aan de hand van de onderstaande formule:

waarbij N de vereiste steekproefgrootte per groep is, α de SD, K de constante (7.9 betekent 80% vermogen en 5% significantie), en (μ2-μ1) is het verschil in SRS totale score tussen groepen.

om ervoor te zorgen dat het onderzoek voldoende vermogen heeft, zal een geblindeerde tussentijdse analyse bij >50% van de oorspronkelijk geplande inschrijving worden uitgevoerd door een onafhankelijke derde partij om de variantie voor mogelijke toename van de steekproefgrootte te schatten.

inclusie-en uitsluitingscriteria

kinderen komen in aanmerking voor dit onderzoek als ze tussen 2 jaar oud zijn.5 en 8 jaar, hebben een medische diagnose van ASD bevestigd door zowel een ontwikkelingspediater in overeenstemming met de criteria vermeld in de Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, versie vijf (DSM-5) , en begin van symptomen na 18 maanden van leeftijd. De ondergrens van 2,5 jaar is gekozen op basis van de leeftijdscriteria van de psychologische beoordelingsinstrumenten, en de bovengrens van 8 jaar is gekozen om het verstorende effect van gedragsveranderingen in verband met het pubertale stadium te vermijden. De vaardigheid van de verzorger in het Engels is een vereiste (vanwege de aard van outcome assessment tools). Vrijwilligers worden uitgesloten als ze werden gediagnosticeerd met ontwikkelingsachterstand sinds de geboorte.

aanvullende inclusiecriteria voor het onderzoek zijn: leverfunctie binnen het normale bereik (albumine 34-48 g/L) en serum 25(OH)D <75 + 10 nmol/L als zij in de winter aan het onderzoek deelnemen en <105 nmol/L + 10 nmol/L als zij in de zomer aan het onderzoek deelnemen. Er werd gekozen voor een variatie van 10 nmol/L vanwege de potentiële variabiliteit van de assay . We hebben twee verschillende cut-off punten voor uitsluiting toegepast omdat er een grote seizoensgebonden variatie in serum 25(OH)d concentraties in Nieuw-Zeeland, variërend van 30 nmol/L tot 44 nmol/L.

instelling

het onderzoek zal plaatsvinden in Auckland, Nieuw-Zeeland. Niet-nuchtere bloedmonsters zullen worden verzameld in de North Shore of Waitakere ziekenhuizen in Auckland, Nieuw-Zeeland. Vragenlijsten en antropometrie zullen worden uitgevoerd aan Massey University, Auckland, Nieuw-Zeeland. Auckland is de grootste stad van Nieuw-Zeeland met een bevolking van iets meer dan een miljoen. Er wordt geschat dat ongeveer 13.000 (32,5 %) personen met ASD in de regio Greater Auckland wonen .

Fase 1-screening

Screening en rekrutering (fase 1 van het onderzoek) vindt plaats over een periode van 24 maanden, die in januari 2015 is begonnen. Kinderen die aan de initiële inclusiecriteria voldoen, zullen bloed afnemen en worden gescreend op voedingstekorten. Zie tabellen 1 en 2 voor resultaatmetingen, testmethoden en schema van inschrijving, interventie en beoordeling.

Pre-interventie voorbereiding

Voorafgaand aan randomisatie en inclusie in de trial, vitamine D, ijzer en vitamine B12 tekorten zullen worden aangepakt. Zie Tabel 3 voor een lijst van voedingstekorten en de beheersstrategieën die in deze studie worden toegepast.

Fase 2-vitamine D en n-3 lcpufa interventie

de interventie bestaat uit 2000 IE Vitamine D3 per dag, 722 mg DHA per dag, 2000 IE Vitamine D3 plus 722 mg DHA per dag of placebo, in de vorm van vier orale capsules. De behandelingsmaterialen worden geleverd in 750 mg gelcapsules met een afscheurmondstuk vervaardigd en geleverd door Douglas Nutrition Ltd., Auckland, Nieuw-Zeeland. De studiecapsules, vitamine D, n-3 LCPUFAs en placebo zijn identiek qua uiterlijk en zijn smaakloos en kleurloos. Het kind moet de inhoud van vier capsules per dag innemen, gemengd met het voedsel van voorkeur of via orale toediening met een injectiespuit. Zie Tabel 4 voor de totale dagelijkse inname en inhoud van elke capsule. Gedurende de studieperiode, kinderen mogen om het even welke therapie of medicatie voor autisme evenals om het even welk supplement hebben op voorwaarde dat het geen vitamine D of omega-3 bevat.

het is aangetoond dat suppletie met 2000 IE Vitamine D3 een veilige dosis is bij zuigelingen , en de Franse Vereniging voor Pediatrie beveelt 1000 tot 1200 IE per dag aan bij zuigelingen die borstvoeding krijgen . De lichaamsmassa van 2,5-8 – jarigen in ons onderzoek zal aanzienlijk groter zijn dan die van zuigelingen, wat het risico op bijwerkingen verder zou moeten verminderen. Bovendien is 2000 IE per dag minder dan de veilige bovengrens van 2500 en 3000 IE / dag die door de IOM wordt voorgesteld voor respectievelijk 1-3 en 4-8 jaar.

de DHA-dosis van 722 mg/dag is fysiologisch relevant en haalbaar via voeding (overeenkomend met ongeveer drie porties vette vis per week) en is vergelijkbaar met doses die gebruikt zijn in andere studies bij kinderen die de effecten van n-3 LCPUFAs op gedrag en leren onderzoeken . Er zijn geen bijwerkingen gemeld bij kinderen met een dosis van 600 mg DHA/dag .

randomisatie, verblindende en verhulde allocatie

kinderen zullen willekeurig worden toegewezen aan een van de vier groepen, na gestratificeerd te zijn naar leeftijd en ernst van ASD. Randomisatie van de actieve / placebocapsules, de gerandomiseerde sequentielijst en groepstoewijzing worden volledig verborgen voor de onderzoekers, kinderen en verzorgers voor de gehele studie, inclusief de data-analyse. Een derde partij die niet betrokken is bij enig aspect van de studie zal een willekeurig blok ontwerp in blokken van vier en acht te genereren met behulp van Randomization.com (http://www.randomization.com/). De derde partij zal een behandelingscode toekennen aan een kind zodra hun geschiktheid voor de interventie is bevestigd en de toestemming van de verzorger is ontvangen. In een noodsituatie waarin het breken van de studieblind vereist is, zijn er plannen voor de hoofdonderzoeker om contact op te nemen met de derde die verantwoordelijk is voor de randomisatie om de toewijzing van de behandeling voor een bepaalde deelnemer bekend te maken.

gegevensverzameling

deelnemers (verzorgers en kinderen) zullen twee keer deelnemen aan de Human Nutrition Research Unit (Hnru) aan Massey University: baseline en 12 maanden. Eenmaal gerekruteerd in Fase 2 en voorafgaand aan het krijgen van een 4 maanden durende levering van supplementen, zullen zorgverleners een aantal vragenlijsten invullen over de kernsymptomen van ASD (sociocommunicative functioning and sensory issues) en afwijkend gedrag als de primaire uitkomstmaat van de studie, en over gastro-intestinale symptomen als de secundaire uitkomstmaat. Zodra de interventie is voltooid (12 maanden), zullen de baseline-beoordelingen van de kernsymptomen van ASD en afwijkend gedrag door zorgverleners worden herhaald. Verzorgers zullen ook wekelijks gastro-intestinale symptoomdagboeken voltooien gedurende de studieperiode.

verdere informatie zal worden verzameld om de kenmerken van de onderzoekspopulatie bij de uitgangssituatie te beschrijven. Deze informatie omvat eet – / eetgedrag, voedseldagboeken, blootstelling aan de zon, huidskleur en antropometrie (gewicht en lengte). Bij het laatste bezoek zal de baseline beoordeling van eet – /eetgedrag herhaald worden en zal het gewicht/lengte van kinderen gemeten worden. Zie Tabel 1 voor uitkomstmetingen en testmethoden.

bloedbemonstering en-analyse

kinderen zullen hun bloedmonsters driemaal laten nemen, baseline (fase 1-screening), 6 maanden (veiligheidsmaatregelen) en 12 maanden (eindpunt). Zie Tabel 1 voor nutritionele biomarkers en testmethoden. De niet-nuchtere bloedmonsters worden verzameld onder toezicht van Pediatrisch personeel en verwerkt in North Shore of Waitakere ziekenhuizen van wdhb laboratory service. Nutritionele biomarkers zullen worden onderzocht aan de hand van een veneus bloedmonster. Deze omvatten de volgende: 25 (OH)D, RBC-vetzuren, calcium, albumine, ijzerstudies, vitamine B12 en folaat, volledig bloedbeeld en vitamine A. Met uitzondering van RBC-vetzuren en vitamine A worden alle biomarkers geanalyseerd in het North Shore Hospital. RBC-vetzuren zullen worden geanalyseerd aan de Universiteit van Wollongong, NSW, Australië, en vitamine A in een laboratorium aan de Massey University, Auckland, Nieuw-Zeeland.

vragenlijsten

de primaire uitkomstmaten zijn psychologische beoordelingen van de kernsymptomen van ASD en gelijktijdig voorkomend probleemgedrag, die worden beschreven in Tabel 1. De secundaire uitkomstmaat is de beoordeling van gastro-intestinale problemen. Er zullen gestandaardiseerde instructies worden gegeven aan alle zorgverleners over het invullen van de vragenlijsten tijdens hun bezoek aan de HNRU. Voordat de deelnemer vertrekt, controleren de onderzoekers van de HNRU alle antwoorden op volledigheid.

Social Responsiveness Scale™, tweede editie (SRS-2): de SRS–2-versies die specifiek zijn voor de leeftijdsgroepen 2,5-4,5 en 4,5 tot en met 18 jaar zullen worden gebruikt. SRS-2 identificeert sociale stoornis geassocieerd met ASDs en kwantificeert de ernst ervan op het gebied van sociaal bewustzijn, sociale informatieverwerking, Wederzijdse sociale communicatie, sociale angst/vermijding en stereotiepe gedrag/beperkte belangen . De klinische Validiteit en gevoeligheid van SRS-2 zijn bepaald in populaties met ASD .

Sensory Processing Measures™ (SPM): de SPM-versies die specifiek zijn voor de leeftijdsgroepen 2-5 en 5-12 jaar zullen worden gebruikt. SPM beoordeelt sensorische verwerking, planning en ideeën (praxis) en maatschappelijke participatie bij kinderen. De schalen meten sociale participatie, visie, gehoor, aanraking, lichaamsbewustzijn (proprioceptie), balans en beweging (vestibulaire functie) en planning en ideeën (praxis) . Deze tool is gestandaardiseerd, gevalideerd en gebruikt bij kinderen met ASD .

Aberrant Behaviour Checklist (ABC): het ABC meet de verscheidenheid aan gedragsproblemen, namelijk prikkelbaarheid, sociale terugtrekking, stereotiep gedrag, hyperactiviteit en ongepaste spraak . Het is gevalideerd bij kinderen met ASD en is op grote schaal gebruikt in behandelingsuitkomststudies van ASD .

gastro-intestinale symptomen vragenlijst: de gastro-intestinale symptomen vragenlijst is speciaal ontworpen voor deze studie en omvat gastro-intestinale klachten en symptomen die het vaakst worden gemeld bij kinderen met ASD . Verzorgers van de deelnemers aan de studie zullen wekelijks online dagboeken ontvangen en zullen gevraagd worden om op te nemen of het kind constipatie, diarree, winderigheid, buikpijn, braken/misselijkheid, opgezette buik, onverklaarbare prikkelbaarheid overdag of/en onverklaarbare nachtelijke ontwaking had tijdens de afgelopen week, en zo ja hoe vaak deze optraden. De vragenlijst over gastro-intestinale symptomen is niet gevalideerd, maar bevat vragen over gastro-intestinale symptomen die het meest worden gemeld bij ASD-populaties, of gedragingen die een gevolg kunnen zijn van gastro-intestinale symptomen. We zijn niet op de hoogte van een gevalideerd instrument voor het beoordelen van gastro-intestinale symptomen bij autistische kinderen, en zeker niet in Nieuw-Zeeland.

Voedingsindex van het eten van kinderen (dobbelstenen): de dobbelstenen is een eenvoudige dieet-kwaliteit evaluatie tool die is ontwikkeld door het onderzoeksteam, op basis van de Nieuw-Zeelandse Ministerie van Gezondheid Voedsel en voeding richtlijnen voor gezonde kinderen en jongeren . Deze tool is gevalideerd in een cohort van Nieuw-Zeelandse gezonde kinderen van 2 tot 8 jaar (ongepubliceerd), en zal worden gevalideerd in ASD kinderen in deze studie tegen de 4-daagse geschatte voedseldagboek en biochemische markers.

Behavioural Paediatrics Feeding Assessment Scale (Bpfas): de BPFAS is een eenvoudig beoordelingsinstrument dat het eetgedrag van een kind en de houding en het gedrag van de ouders meet. Het is een 35-item schaal vragenlijst bestaande uit 25-likert schaal (5 punten) vragen over het gedrag van kinderen en 10 dichotome vragen over de houding en het gedrag van ouders. De Cut-off scores voor de BPFA ‘ s zijn onlangs vastgesteld . De BPFAS is de meest betrouwbare ouder-toegediend voeding vragenlijst, met een goede interne validiteit en test-hertest betrouwbaarheid .

vierdaagse geschatte voedseldagboek: de gegevens over de inname van voedsel worden verzameld door middel van een 4-daagse geschatte voedseldagboek, inclusief een weekenddag. Instructies over hoe u het voedseldagboek nauwkeurig kunt voltooien, worden bij het voedseldagboek geleverd. De deelnemers krijgen een gratis, vooraf geadresseerd enveloppe voor de terugzending van het boekje. De gemiddelde inname van macro – en micronutriënten zal worden beoordeeld over vier gerapporteerde dagen met behulp van Foodworks Professional Edition 7 (Xryis Software, Brisbane, QLD, Australië, 2012).

in dit onderzoek werd gekozen voor een voedseldagboek van 4 dagen vanwege de hoge belasting van de respondenten en de tijdrovende kenmerken van langere voedseldagboeken, zoals een voedseldagboek van 7 dagen. Vanwege de grote variatie in de inname van nutriënten binnen de mens wordt aanbevolen de inname van nutriënten over een langere periode te registreren om een zeer nauwkeurige schatting van de inname te hebben. Echter, als een 4-daagse voedseldagboek verschillende dagen willekeurig beslaat, kan het nauwkeurige schattingen van de inname via de voeding geven .

informatie over blootstelling aan de zon en huidskleur, voedingssupplementen en eventuele speciale dieetschema ‘ s zal worden verzameld door middel van vragenlijsten die speciaal zijn ontworpen voor het doel van de huidige studie. De sun exposure questionnaire bevat een vraag over het geloof en de houding van de verzorger ten opzichte van blootstelling aan de zon, evenals vragen over land en stad van verblijf tijdens de zwangerschap, seizoen van de geboorte en de gevoeligheid van het kind voor temperatuur en licht extremen.

Compliance to medication/compliance to study protocol

verzorgers zullen wekelijks e-mails ontvangen met een link naar het online compliance and gastrointestinal issues dagboek en een tip/feit over autisme en voedingskwesties. Zorgverleners zullen telefonisch worden gecontacteerd op 1, 3, 6 en 9 maanden voor morele doeleinden en om naleving aan te moedigen. Verzorgers ontvangen ook driemaandelijkse proefnieuwsbrieven. De nieuwsbrieven bevatten een update over de studie, algemene onderwerpen over ASD, de ervaring van een verzorger met betrekking tot dat onderwerp, en amusement/wedstrijden voor de studiekinderen.

om de vier maanden zullen nieuwe interventiematerialen naar de deelnemers worden gestuurd en zorgverleners zullen worden gevraagd de flessen van de voorgaande maanden apart te plaatsen, met eventuele ongebruikte capsules erin, om bij hun volgende bezoek (6 of 12 maanden) te worden geretourneerd, in welk stadium ongebruikte capsules zullen worden geteld en geregistreerd. De naleving van de behandeling zal worden geanalyseerd door de resterende supplementen van elke deelnemer te tellen zodra ze de interventie hebben voltooid.

bijwerkingen

alle deelnemers zullen na 6 maanden worden teruggeroepen voor een bloedtest om te controleren op hypervitaminose D (serum 25(OH)D >225 nmol/L) en hypercalciëmie (serum Ca >2,7 mmol/l). De resultaten worden gecontroleerd door een derde partij die gedeblokkeerd is (maar niet betrokken is bij de analyse van de resultaten). De derde partij zal de resultaten van de bloedtest de-identificeren en deze naar de kinderarts en senior onderzoeker sturen voor beoordeling en aanbeveling als het serum 25(OH)D of calciumgehalte van het kind boven de veilige bovengrens ligt. Als 25 (OH) d-concentraties 225 nmol/L bereiken of naderen, of als hypercalciëmie aanwezig is, zal de toediening van de dosis worden aangepast.

Compliance-en gastro-intestinale symptoomdagboeken zullen wekelijks worden gecontroleerd en alle bijwerkingen zullen worden geregistreerd in het logboek voor bijwerkingen om de algemene gezondheids-en gedragsreacties van het kind bij te houden. In het geval van bijwerkingen zal de gezondheid van het kind gedurende drie tot vier opeenvolgende weken nauwkeuriger worden gecontroleerd, en als de bijwerking aanhoudt, zullen de meldingen voor verder onderzoek worden doorverwezen naar de kinderarts en senior onderzoeker in het onderzoek.

verspreiding van de resultaten

na ontvangst en analyse van het voedseldagboek en na voltooiing van de biochemische analyses bij screening ontvangt elke deelnemer een feedbackformulier. Antropometrische metingen en bloedresultaten (ijzerstudies, vitamine B12, folaat en volledig bloedbeeld) zullen ook worden opgenomen. Zodra de rekrutering voor het onderzoek is voltooid, zullen deelnemers die niet zijn overgegaan in het onderzoek kennisgeving van hun vitamine D en RBC-vetzuurniveaus ontvangen.

na afloop van de studie zullen de deelnemers worden geïnformeerd over hun baseline-en eindstatus van vitamine D en RBC-vetzuur, en of zij de actieve of placebo-dosis gebruikten. Zij zullen ook een samenvatting ontvangen van de psychologische beoordelingsresultaten van SRS-2 en SPM.

deelnemers en andere belanghebbenden (zoals gezondheidswerkers, gezondheidsraden, primaire gezondheidsorganisaties, ASD-ondersteuningsgroepen) zullen toegang krijgen tot de bevindingen van de studie. De resultaten zullen worden gepresenteerd op wetenschappelijke conferenties, zowel nationaal als internationaal, voorbereid voor publicatie in peer-reviewed tijdschriften, en verspreid naar de media.

gegevensverwerking en statistische analyse

naam-en adresgegevens worden bewaard in Microsoft Excel. Checkboxen zullen de voortgang van een deelnemer door middel van de studie te registreren. Alle andere gegevens worden ingevoerd in één Microsoft Excel-spreadsheet met deelnemers die alleen worden geïdentificeerd door hun unieke Onderwerpnummer. Scorings van de vragenlijsten worden dubbel gecontroleerd door de psycholoog en de onderzoeker. Alle inzendingen worden dubbel gecontroleerd door een ander lid van het onderzoeksteam. Alle documenten worden veilig onder vertrouwelijke voorwaarden opgeslagen en gedurende 5 jaar gearchiveerd.

statistische analyse zal worden uitgevoerd met IBM SPSS versie 21.0 (IBM Corp; uitgebracht in 2012. IBM SPSS statistieken voor Windows versie 21.0. Armonk, NY, USA). Voor aanvang van de statistische analyse worden de gegevens schoongemaakt en gecontroleerd op coderingsfouten. De gegevens worden gecontroleerd op plausibiliteit door willekeurig de nauwkeurigheid en volledigheid te controleren en te toetsen aan brongegevens. De variabelen zullen worden getest op normaliteit met behulp van de Kolmogorov-Smirnov test, de Shapiro-Wilk test en normaliteit plots. Niet-normaal gedistribueerde gegevens zullen worden omgezet in Geschatte normale distributies door logaritmische transformaties. De gegevens worden op passende wijze gerapporteerd als gemiddelde (standaardafwijking) voor normaal verspreide gegevens; getransformeerde gegevens worden terug-getransformeerd van samenvattende statistieken naar geometrisch gemiddelde (95% BI), niet-normaal gedistribueerde gegevens worden beschreven als mediaan (25e, 75e percentiel) en categorische gegevens als frequenties.

Basislijnkenmerken van deelnemers zullen worden vergeleken tussen groepen met behulp van variantieanalyse (ANOVA) voor parametrische gegevens en de Kruskal-Wallis test voor niet-parametrische gegevens. De primaire analyse, het vergelijken van de effecten van de behandeling op symptomen van autisme over 12 maanden, zal worden uitgevoerd met behulp van een gegeneraliseerde lineaire mixed-models procedure. Behandelingen en tijd zullen worden opgenomen als vaste effecten en de interacties tussen interventies en tijd zullen worden getest. Als significante hoofdeffecten of interactie-effecten worden waargenomen, zal post-hoc analyse met Bonferroni aanpassingen worden uitgevoerd. Mogelijke verstorende factoren en effectmodificatoren(b.v. baseline 25 (OH)D en RBC vetzuren, symptomen van autisme bij baseline, leeftijd en geslacht) zullen onderzocht worden binnen het model. Logistische regressie zal worden gebruikt om de multiplicatieve interactie te testen. Rothman ‘ s synergy index, die gelijk zou zijn aan eenheid onder addiviteit, en minder dan eenheid wanneer antagonisme wordt gesuggereerd, zal worden gebruikt om het gepostuleerde interactie-effect van vitamine D en omega-3 LCPUFAs op kernsymptomen van ASS te onderzoeken.

de secundaire analyse, waarbij de effecten van de behandeling op gastro-intestinale symptomen gedurende 12 maanden worden vergeleken, zal volgens dezelfde procedure worden uitgevoerd. Mogelijke verstorende factoren en effectmodificatoren (b.v. basislijndiagnose van gastro-intestinale symptomen en medicatie/supplement gebruik) zullen onderzocht worden binnen het model.

verschillen tussen deelnemers die de studie voltooien en zich terugtrekken, zullen worden geanalyseerd met behulp van een onafhankelijke t–test of de Mann-Whitney-test voor continue variabelen (bv. leeftijd) en chi-kwadraat voor categorische variabelen (bv. geslacht).

associaties tussen de ernst van ASD-symptomen en de voedingstoestand (met name vitamine D, RBC-vetzuren, ijzer en vitamine B12) bij baseline zullen worden beoordeeld met behulp van regressieanalyse. De informatie zal worden gebruikt om de behandelingsrespons te beoordelen op basis van tertielen van voedingsstatus die een significante relatie met de ernst van ASD vertonen.

zowel intention-to-treat als per-protocol analyses zullen worden gebruikt, hoewel de primaire analysemethode intention-to-treat zal zijn. De statistische significantie zal worden gebaseerd op twee-tailed tests waarbij P <0,05 als significant wordt beschouwd.