sommige micro-organismen kunnen zwavel (zwavel) bevattende verbindingen tijdens het metabolisme tot waterstofsulfide reduceren, wat gewoonlijk wordt gebruikt als testmaat voor de identificatie ervan in laboratoria. Talrijke methodes worden gebruikt om H2S productie door micro-organismen te ontdekken die met de bron van zwavel en de metaalzouten variëren die worden gebruikt om H2S vorming aan te geven. SIM is gevoeliger bij de detectie van H2S dan TSI of KIA, vanwege zijn halfvaste aard, zijn gebrek aan interfererende koolhydraten, en het gebruik van peptonized ijzer als indicator. Loodacetaat papier is echter 10 keer gevoeliger dan andere media.
doelstellingen
bepalen of de microbe zwavelhoudende verbindingen reduceert tot sulfiden om waterstofsulfidegas te produceren.
beginsel
een ijzerverbinding en een zwavelverbinding zijn opgenomen in het testmedium voor de productie van waterstofsulfidegas. Waterstofsulfide wordt geproduceerd als de zwavelverbinding wordt verminderd door de bacteriële stam. Deze test bepaalt dus of de microbe zwavelhoudende verbindingen vermindert tot sulfiden tijdens het proces van metabolisme. H2S wordt geproduceerd door bepaalde bacteriën door vermindering van zwavelhoudende aminozuren zoals cystine, methionine of door vermindering van anorganische zwavelverbindingen zoals thiosulfaten, sulfaten of sulfieten tijdens eiwitafbraak of wanneer anaërobe ademhaling de elektronen naar zwavel in plaats van naar zuurstof brengt. In beide gevallen wordt H2S geproduceerd (waterstofsulfidegas) dat reageert met de ijzerverbinding om het zwarte neerslag van ijzersulfide te vormen. De zwarte kleur fungeert als een indicator voor de aanwezigheid van waterstofsulfide. De detectie van waterstofsulfide (H2S) gas geproduceerd door een organisme. wordt voornamelijk gebruikt om te helpen bij de identificatie van dat specifieke organisme.
Media:
deze test kan worden uitgevoerd met behulp van verschillende media, waaronder triple Sugar Iron (TSI), Kligler ‘ s Iron Agar (KIA), Sim medium en loodacetaat papier.
- sulfiet-indoolmotiliteit (Sim) medium voor de detectie van H2S
dit medium bevat ammoniumijzer (II) sulfaat en natriumthiosulfaat, die samen dienen als indicatoren voor de productie van waterstofsulfide. De productie van waterstofsulfide kan worden gedetecteerd wanneer ferrosulfide, een zwart neerslag, wordt geproduceerd als gevolg van een reactie van ferroammoniumsulfaat met H2S-gas.
samenstelling:
Runderextract 3,0 g pepton 30,0 g Ammoniumijzer ( II) sulfaat 0,2 g natriumthiosulfaat 0,025 g Agar 3,0 g uiteindelijke pH (bij 25°C) 7,3±0.2 gedestilleerd water 1000ml
- Ijzeragars voor de detectie van H2S
dit medium is geschikt voor de detectie van H2S-productie door enterobacteriën. H2S wordt gedetecteerd door het ijzercitraat in het medium - Loodacetaatpapiertest om H2S
te detecteren wanneer een gevoelige techniek voor het detecteren van H2S-productie vereist is, wordt de loodacetaatpapiertest aanbevolen.
Procedure
I. In Sulfietindool motiliteit (Sim) medium
- Ent het organisme in geëtiketteerde buis door middel van stab-inoculatie.Incubeer de geïnoculeerde buizen gedurende 24-48 uur bij 37°C.
- let op de vorming van zwart neerslag op het medium.
II. in Kliger ijzeragar (KIA) en Triple Sugar Ijzeragar (TSIA))
- Ent het testorganisme in KIA en incubeer het ‘ s nachts bij de juiste temperatuur.
- let op zwart worden van het medium.
III. Loodacetaatpapiertest
- Ent een buis of fles met steriel peptonwater of nutriëntenbouillon met het testorganisme.
- plaats een loodacetaat-papieren strook in de hals van de fles of buis boven het medium en sluit goed af.Incubeer het geïnoculeerde medium bij 35-37 ° C en onderzoek dagelijks of het onderste gedeelte van de strook zwart wordt.
resultaten
- positief resultaat: Zwart worden op het medium
- negatief resultaat:Geen zwart worden op het medium
gebruikt
- het wordt voornamelijk gebruikt om leden van de familie Enterobacteriaceae te helpen identificeren en incidenteel om andere bacteriën zoals Bacterioidessps en Brucella sps te onderscheiden.
- de test helpt bij de identificatie en differentiatie van leden van Enterobacteriaceae (enterica) van andere Gram – bacillen.
- het is vooral nuttig bij het identificeren van Salmonella -, Francisella-en Proteus-soorten.
beperkingen
- H2S-productie kan worden geremd in TSI voor organismen die sucrose gebruiken en het enzymmechanisme onderdrukken dat resulteert in de productie van H2S.
- loodacetaat is giftig voor bacteriën en kan de groei van sommige bacteriën remmen. Laat de media de strip niet aanraken.
- voor volledige identificatie wordt aanbevolen dat biochemische, immunologische, moleculaire of massaspectrometrietests worden uitgevoerd op kolonies uit zuivere cultuur.
- Tille, P. M., & Forbes, B. A. (2014). Bailey & Scott ‘ s diagnostic microbiology (dertiende editie.). St. Louis, Missouri: Elsevier.
- Cappuccino J. G. en Sherman N. 2008. Microbiology: a Laboratory Manual, 8th ed. Pearson Benjamin Cummings, San Francisco, CA, USA.
- www.vumicro.com/vumie/help/VUMICRO/Hydrogen_Sulfide_Production_Test.htm
- mic.microbiologyresearch.org/content/journal/micro/10.1099/00221287-8-3-397
- https://microbenotes.com/hydrogen-sulfide-h2s-production-test/
- www.microbiologyresearch.org/docserver/fulltext/micro/8/3/mic-8-3-397.pdf?expires=1543332392&id=id&accname=guest&checksum=C42277C712F05E5951241893FC8EC3F7
- spot.pcc.edu/~jvolpe/b/bi234/lab/differentialMedia/H2Sproduction.html
- https://senthilprabhu.blogspot.com/2017/10/hydrogen-sulphide-h2s-production-test.html
- https://jb.asm.org/content/jb/10/5/439.full.pdf
