informații tehnice și produse conexe
caracteristicile produsului pentru peroxidază de hrean nativă
coeficient de extincție: EmM = 100 atunci când este măsurat la 403 nm.1
greutate moleculară: (aprox. 44 kDa)
include lanțul polipeptidic (33.890 Daltoni), hemin plus Ca2+ (aprox. 700 Daltoni),
și carbohidrați (9400 Daltoni).3
punct izoelectric: Izozimele variază între 3,0 – 9,0
există cel puțin șapte izozime de HRP.2
peroxidaza de hrean (HRP) este izolată din rădăcinile de hrean (Amoracia rusticana) și aparține grupului de peroxidaze feroprotoporfirină. HRP este o polipeptidă cu un singur lanț care conține patru punți disulfidice. Este o glicoproteină care conține 18% carbohidrați. Compoziția de carbohidrați constă din galactoză, arabinoză, xiloză, fucoză, manoză, manozamină și galactozamină, în funcție de izozima specifică.2
specificitatea substratului
HRP se combină ușor cu peroxidul de hidrogen (H2O2), iar complexul rezultat poate oxida o mare varietate de donatori de hidrogen cromogen. De asemenea, poate utiliza substraturi chemiluminescente, cum ar fi luminolul și izoluminolul, și substraturi fluorogene, cum ar fi tiramina, acidul homovanilic și acidul 4–hidroxifenil acetic.
Indicele de substrat al enzimei Explorer oferă legături cu mai mulți donatori de hidrogen cromogenici și chemiluminiscenți utilizați pentru a testa activitatea peroxidazei.
inhibitori
următorii compuși sunt inhibitori ai peroxidazei hreanului: azidă de sodiu, cianură, L–cistină, dicromat, etilenetiouree, hidroxilamină, sulfură, vanadat, acid p–aminobenzoic, Cd+2, Co+2, Cu+2, Fe+3, Mn+2, Ni+2, Pb+2,4
dependența de pH
pH-ul optim al HRP este în intervalul 6.0-6.5. Activitatea la pH 7,5 este de 84% din maxim. Enzima este cea mai stabilă în intervalul de pH de la 5,0 la 9,0.5
Aplicații
peroxidaza de hrean este utilizată pe scară largă ca etichetă pentru imunoglobuline în multe aplicații imunochimice diferite, inclusiv ELISA, imunoblotting și imunohistochimie. HRP poate fi conjugat cu anticorpi prin mai multe metode diferite, inclusiv glutaraldehida, oxidarea periodică, prin legături disulfidice și, de asemenea, prin amino și tiol direcționat cerneluri încrucișate. HRP este cea mai dorită etichetă pentru anticorpi, deoarece este cea mai mică și mai stabilă dintre cele trei etichete enzimatice cele mai populare (HRP, fosfatază alcalină și B-galactozidază), iar glicozilarea sa duce la o legare nespecifică mai mică.6 protocoalele care descriu metodologiile de glutaraldehidă și conjugare periodică pot fi revizuite în Harlow, E. și colab.7
oferim mai mulți reactivi de detecție cromogenici și chemiluminiscenți pentru aplicații blotting, histologie și ELISA.
de asemenea, oferim o linie completă de anticorpi conjugați HRP.
instrucțiuni de preparare
alegerea solventului va depinde de aplicația dorită. Enzimele sub formă de pulbere sunt apă solubilă sau tampon fosfat de 0,1 m, pH 6 (10 mg/mL). Suspensia (P6140) poate fi diluată în apă.
depozitare/stabilitate
peroxidazele sub formă de pulbere trebuie refrigerate la 2-8 C. depozitarea congelatorului este, de asemenea, acceptabilă, dar nu este necesară. Suspensia (P6140) trebuie depozitată la 2-8 cmc.dacă este depozitată corespunzător, aceste produse au o durată de valabilitate de cel puțin doi ani.
stabilitatea temperaturii pulberilor liofilizate
stabilitatea temperaturii soluțiilor
stabilitatea soluțiilor vs.pH
stabilitatea soluțiilor vs. concentrație
profilul RZ
RZ (Reinheitszahl): raportul de absorbție A403/a275. Este o măsură a conținutului de hemină al peroxidazei, nu a activității enzimatice. Chiar și preparatele cu o valoare ridicată a RZ pot avea activitate enzimatică scăzută. Pentru conjugarea proteinelor, cum ar fi anticorpii la peroxidază, alegeți o peroxidază cu o valoare RZ de cel puțin 3,0.
Spectrophotometric Method to Determine the RZ Value for Peroxidase
Peroxidase Enzymes for Labeling
« Meniu
