G418

G418 (Geneticin, Invitrogen): se dizolvă în apă la 200 mg/ml, se sterilizează filtrul și se păstrează în alicote la 4 C.

clonNAT (nourseothricin, Werner BioAgents, Jena, Germania): se dizolvă în apă la 100 mg/ml, se sterilizează filtrul și se păstrează în alicote la 4 C.

Canavanină (sare sulfat de l-Canavanină, Sigma, c-9758): se dizolvă în apă la 100 mg/ml, se filtrează sterilizează și se păstrează în alicote la 4 C.

tializină (clorhidrat de S-(2-aminoetil)-L-cisteină, Sigma, a-2636): Dissolve in water at 100 mg/ml, filter sterilize, and store in aliquots at 4 °C.

Amino acids supplement powder mixture for synthetic media (complete): Contains 3 g adenine (Sigma), 2 g uracil (ICN), 2 g inositol, 0.2 g para-aminobenzoic acid (Acros Organics), 2 g alanine, 2 g arginine, 2 g asparagine, 2 g aspartic acid, 2 g cysteine, 2 g glutamic acid, 2 g glutamine, 2 g glycine, 2 g histidine, 2 g isoleucine, 10 g leucine, 2 g lysine, 2 g methionine, 2 g phenylalanine, 2 g proline, 2 g serine, 2 g threonine, 2 g tryptophan, 2 g tyrosine, and 2 g valine (Fisher). Amestecul de pulbere Drop-out (DO) este o combinație a ingredientelor de mai sus minus suplimentul adecvat. Se utilizează două grame de amestec de pulbere DO pe litru de mediu.

supliment de aminoacizi pentru mediu de sporulare: conține 2 g histidină, 10 g leucină, 2 g lizină, 2 g uracil; se utilizează 0,1 g amestec de pulbere de suplimente de aminoacizi pe litru de mediu de sporulare.

glucoză (dextroză, Fisher): se prepară 40% soluție, se autoclavează și se păstrează la temperatura camerei.

YEPD: Se adaugă 120 mg adenină (Sigma), 10 g extract de drojdie, 20 g peptonă, 20 g bacto agar (bd Difco) la 950 ml apă într-un balon de 2 l. După autoclavare, se adaugă 50 ml de soluție de glucoză 40%, se amestecă bine, se răcește la ~ 65 C și se toarnă plăci.

YEPD + G418: se răcește mediul Yepd până la ~ 65 CTC, se adaugă 1 ml soluție stoc G418 (concentrație finală 200 mg/l), se amestecă bine și se toarnă farfurii.

YEPD + clonNAT: se răcește mediul Yepd până la ~ 65 CTC, se adaugă 1 ml soluție stoc de clonNAT (concentrație finală 100 mg/l), se amestecă bine și se toarnă farfurii.

YEPD + G418 / clonNAT: Se răcește mediul YEPD până la ~ 65 CTC, se adaugă 1 ml de G418 (concentrație finală 200 mg/l) și 1 ml de soluții stoc clonNAT (concentrație finală 100 mg/l), se amestecă bine și se toarnă plăci.

sporulare îmbogățită: se adaugă 10 g acetat de potasiu (Fisher), 1 g extract de drojdie, 0,5 g glucoză, 0,1 g supliment de aminoacizi amestec de pulbere pentru sporulare, 20 g bacto agar la 1 l apă într-un balon de 2 l. După autoclavare, se răcește mediul până la ~ 65 centi C, se adaugă 250 centi de soluție stoc G418 (concentrație finală 50 mg/l), se amestecă bine și se toarnă plăcile.

(SD/MSG) − His/ARG/Lys + canavanină/tializină/G418: se adaugă 1,7 g bază azotată de drojdie fără aminoacizi sau sulfat de amoniu (bd Difco), 1 g MSG (hidrat de sare de sodiu acid L-glutamic, Sigma), 2 g amestec de Pulbere supliment de aminoacizi (DO − His/Arg/Lys), 100 ml apă într-un balon de 250 ml. Se adaugă 20 g bacto agar în 850 ml apă într-un balon de 2 l. Autoclavă separat. Se combină soluții autoclavate, se adaugă 50 ml glucoză 40%, mediu rece până la ~ 65 CTC, se adaugă 0,5 ml canavanină (50 mg/l), 0,5 ml tializină (50 mg/l) și 1 ml g418 (200 mg/l) soluții stoc, se amestecă bine și se toarnă plăci. Sulfatul de amoniu împiedică funcția G418 și clonNAT. Prin urmare, mediul sintetic care conține aceste antibiotice este realizat cu acid glutamic monosodic ca sursă de azot (Cheng și colab., 2000).

(SD/MSG) − His/ARG/Lys + canavanină/tializină/clonNAT: se adaugă 1,7 g bază azotată de drojdie fără aminoacizi sau sulfat de amoniu, 1 g MSG, 2 g amestec de Pulbere supliment de aminoacizi (DO − His/Arg/Lys), 100 ml apă într-un balon de 250 ml. Se adaugă 20 g bacto agar în 850 ml apă într-un balon de 2 l. Autoclavă separat. Se combină soluții autoclavate, se adaugă 50 ml glucoză 40%, mediu rece până la ~ 65 centi C, se adaugă 0.5 ml canavanină (50 mg/l), 0,5 ml tializină (50 mg/l) și 1 ml clonNAT (100 mg/l) soluții stoc, se amestecă bine și se toarnă plăci.

(SD/MSG) − His/ARG/Lys + canavanină/tializină/G418/clonNAT: se adaugă 1,7 g bază azotată de drojdie fără aminoacizi sau sulfat de amoniu, 1 g MSG, 2 g amestec de Pulbere supliment de aminoacizi (DO − His/Arg/Lys), 100 ml apă într-un balon de 250 ml. Se adaugă 20 g bacto agar în 850 ml apă într-un balon de 2 l. Autoclavă separat. Se combină soluții autoclavate, se adaugă 50 ml glucoză 40%, mediu rece până la ~ 65 CTC, se adaugă 0,5 ml Canavanină (50 mg/l), 0.5 ml soluții stoc de tializină (50 mg/l), 1 ml G418 (200 mg/l) și 1 ml clonNAT (100 mg/l), se amestecă bine și se toarnă plăci.

(SD/MSG) complet: se adaugă 1,7 g bază azotată de drojdie fără aminoacizi sau sulfat de amoniu, 1 g MSG, 2 g amestec de Pulbere supliment de aminoacizi (complet), 100 ml apă într-un balon de 250 ml. Se adaugă 20 g bacto agar în 850 ml apă într-un balon de 2 l. Autoclavă separat. Se combină soluțiile autoclavate, se adaugă 50 ml de glucoză 40%, se amestecă bine, se răcește mediul până la ~ 65 C și se toarnă plăcile.

SD − His/Arg/Lys + canavanină/tializină: adăugați 6.7 g bază azotată de drojdie w/o aminoacizi (bd Difco), 2 g amestec de Pulbere supliment de aminoacizi (DO − His/Arg/Lys), 100 ml apă într-un balon de 250 ml. Se adaugă 20 g bacto agar în 850 ml apă într-un balon de 2 l. Autoclavă separat. Se combină soluții autoclavate, se adaugă 50 ml glucoză 40%, mediu rece până la ~ 65 CTC, se adaugă 0,5 ml canavanină (50 mg/l) și 0,5 ml tializină (50 mg/l) soluții stoc, se amestecă bine și se toarnă plăci. Acest mediu nu conține antibiotice precum G418 sau clonNAT și, prin urmare, sulfatul de amoniu este utilizat ca sursă de azot.

SD − Leu/ARG/Lys + canavanină/tializină: se adaugă 6,7 g bază azotată de drojdie w/o aminoacizi, 2 g amestec de Pulbere supliment de aminoacizi (DO − Leu/Arg/Lys), 100 ml apă într-un balon de 250 ml. Se adaugă 20 g bacto agar în 850 ml apă într-un balon de 2 l. Autoclavă separat. Se combină soluții autoclavate, se adaugă 50 ml glucoză 40%, mediu rece până la ~ 65 CTC, se adaugă 0,5 ml canavanină (50 mg/l) și 0,5 ml tializină (50 mg/l) soluții stoc, se amestecă bine și se toarnă plăci.