Alguns microrganismos têm a capacidade de reduzir o enxofre (Enxofre) contendo compostos de sulfeto de hidrogênio durante o metabolismo, que é comumente empregado como um teste de medida para a sua identificação em laboratórios. Numerosos métodos são usados para detectar a produção de H2S por microorganismos que variam com a fonte de enxofre e os sais metálicos usados para indicar a formação de H2S. SIM é mais sensível na detecção de H2S do que ETI ou KIA, devido à sua natureza semisolida, à sua falta de hidratos de carbono interferentes e ao uso de ferro peptonizado como indicador. No entanto, o papel acetato de chumbo é 10 vezes mais sensível do que outros meios.
objectivos
para determinar se o micróbio reduz os compostos contendo enxofre a sulfetos para produzir gás sulfureto de hidrogénio.
princípio
um composto de ferro e um composto de enxofre são incluídos no meio de ensaio para testar a produção de gás sulfeto de hidrogênio. Sulfeto de hidrogênio é produzido se o composto de enxofre é reduzido pela estirpe bacteriana. This test thus determines whether the microbe reduces sulfur-containing compounds to sulfides during the process of metabolism. H2S é produzido por certas bactérias através da redução de aminoácidos contendo enxofre como cistina, metionina ou através da redução de compostos inorgânicos de enxofre, tais como tiossulfatos, sulfatos ou sulfitos durante a degradação proteica ou quando a respiração anaeróbica envia os elétrons para enxofre em vez de oxigênio. Em ambos os casos H2S é produzido (gás sulfeto de hidrogênio) que reage com o composto de ferro para formar o precipitado negro de sulfeto férrico. A cor preta atua como um indicador para a presença de sulfeto de hidrogênio. Detecção de gás sulfureto de hidrogénio (H2S) produzido por um organismo. é utilizado principalmente para ajudar na identificação desse organismo específico.
meios:
este teste pode ser realizado com a utilização de vários meios, incluindo ferro Triplo (ETI), ágar de Ferro de Kligler (KIA), meio SIM e papel acetato de chumbo.
- Sulfito de indol motilidade (SIM) médio para detectar H2S
Este meio contém ferroso, sulfato de amônia e tiossulfato de sódio, que, em seguida, juntos, servem como indicadores para a produção de sulfeto de hidrogênio. A produção de sulfeto de hidrogênio pode ser detectada quando sulfeto ferroso, um precipitado Negro, é produzido como resultado de sulfato de amônio ferroso reagindo com gás H2S.
composição:
extrato de carne 3.0 g peptona 30.0 g sulfato de amónio ferroso 0.2 g tiossulfato de sódio 0.025 g Agar 3.0 g pH Final (a 25 ° C) 7.3±0.2 água destilada 1000ml
- ágar de ferro para detectar H2S
este meio é adequado para detectar a produção de H2S por enterobactérias. Detecta-se H2S pelo citrato férrico contido no meio - ensaio em papel com acetato de chumbo para detectar H2S
quando é necessária uma técnica sensível para detectar a produção de H2S, recomenda-se o ensaio em papel com acetato de chumbo.
Procedure
I. In sulfite indole motility (SIM) medium
- Inoculate the organism into labeled tube by means of stab inoculation.
- incubar os tubos inoculados a 37°C durante 24-48 horas.
- Observe para a formação de precipitado negro no meio.
II. na ágar de Ferro de Kligler (KIA) e na ágar de Ferro de açúcar Triplo (TSIA))
- inocular o organismo em estudo em KIA e incubá-lo a uma temperatura adequada durante a noite.
- Observe para o escurecimento do meio.
III. ensaio em papel com acetato de chumbo
- inocular um tubo ou frasco de água de peptona estéril ou caldo de nutrientes com o organismo testado.
- insira uma tira de papel acetato de chumbo no pescoço do frasco ou tubo acima do meio e tape bem.
- incubar o meio inoculado a 35-37oc, e examinar diariamente para um escurecimento da parte inferior da tira.
Resultados
- resultado Positivo:Enegrecimento do meio
- resultado Negativo:Não enegrecimento do meio
Usa
- é usado principalmente para ajudar na identificação de membros da família Enterobacteriaceae, e, ocasionalmente, para diferenciar de outras bactérias, tais como Bacteroidessps e Brucella sps.
- the test aids in the identification and differentiation of members of Enterobacteriaceae (enterics) from other Gram – bacilli.É especialmente útil na identificação das espécies de Salmonella, Francisella e Proteus.
Limitações
- produção de H2S podem ser inibidos TSI para organismos que utilizam a sacarose e suprimir a enzima mecanismo que resulta na produção de H2S.
- acetato de Chumbo é tóxico para as bactérias e podem inibir o crescimento de algumas bactérias. Não permita que a mídia toque na faixa.
- recomenda-se que os testes bioquímicos, imunológicos, moleculares ou de espectrometria de massa sejam realizados em colónias de cultura pura para identificação completa.
- Tille, P. M., & Forbes, B. A. (2014). Bailey & Scott’s diagnostic microbiology (Thirteenth edition.). St. Louis, Missouri: Elsevier.
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- www.vumicro.com/vumie/help/VUMICRO/Hydrogen_Sulfide_Production_Test.htm
- mic.microbiologyresearch.org/content/journal/micro/10.1099/00221287-8-3-397
- https://microbenotes.com/hydrogen-sulfide-h2s-production-test/
- www.microbiologyresearch.org/docserver/fulltext/micro/8/3/mic-8-3-397.pdf?expires=1543332392&id=id&accname=guest&checksum=C42277C712F05E5951241893FC8EC3F7
- spot.pcc.edu/~jvolpe/b/bi234/lab/differentialMedia/H2Sproduction.html
- https://senthilprabhu.blogspot.com/2017/10/hydrogen-sulphide-h2s-production-test.html
- https://jb.asm.org/content/jb/10/5/439.full.pdf
