Definition av falskt positiva reaktioner vid Screening för hepatit C-virusantikroppar

i dagliga laboratorierutiner är tillförlitlig diagnos av hepatit C-virus (HCV) – infektion inte alltid möjlig genom ensam användning av en HCV-enzymimmunanalys (EIA), eftersom det är välkänt att för ett antal patienter ger denna analys falskt positiva resultat (4, 8, 17). Därför måste resultat som erhållits genom MKB bekräftas genom ytterligare testning. Den kommersiellt tillgängliga analysen RIBA 2.0 (Chiron Corporation) uppfyller emellertid inte kriterierna som definierar en bekräftelseanalys eftersom den består av rekombinanta proteiner som är identiska med dem i MKB (1, 5, 9). HCV PCR kan inte användas för bekräftelse av positiva MKB-resultat, eftersom ett negativt PCR-resultat inte utesluter möjligheten till HCV-infektion med låg nivå viremi (under detektionsgränsen). Dessutom är PCR för mödosamt och dyrt att användas regelbundet som en bekräftande analys. Därför har vi etablerat en HCV-remsa immunoblot-analys (SIA) (Universit aux-Krankenhaus Eppendorf SIA) bestående av fyra rekombinanta proteiner, härledda från kärnan och tre icke-strukturella regioner (NS3, NS4 och NS5) av HCV, som skiljer sig från de som används i HCV EIA (5).

i den aktuella studien jämförde vi resultaten från en andra generationens HCV MKB med resultaten från UKE SIA för 2 283 serumprover. Syftet var att bedöma betydelsen av positiva resultat i HCV MKB för att definiera kriterier för utförandet av ytterligare tester för att på ett tillförlitligt sätt diagnostisera HCV-infektion i den dagliga laboratorierutinen. Sera drogs från 2 283 personer som bodde i norra Tyskland runt staden Hamburg. De skickades till vårt laboratorium under misstanke om HCV-infektion på grund av antingen förhöjda leverenzymvärden (alaninaminotransferas, >45 U/liter) eller kliniska tecken på hepatit (gulsot och övre buksmärta) eller riskfaktorer för parenteralt överförda sjukdomar, såsom kronisk hemodialys, blodtransfusion eller intravenös droganvändning. Vid tidpunkten för undersökningen testade de negativt för akut infektion med HAV (anti-HAV immunoglobulin M-antikroppar) och HBV (hepatit B-ytantigen). Upprepade undersökningar utfördes som uppföljning var 3: e månad i 1 år. För serologisk screening en andra generationens HCV MKB (Abbott Laboratories, North Chicago, Ill.) utfördes. För bekräftelse av HCV MKB-resultat testades sera parallellt av UKE SIA som tidigare beskrivits (5). Immunoblot-analysen ansågs positiv när antikroppar mot minst två olika rekombinanta proteiner var detekterbara. Reaktivitet mot endast ett enda protein bedömdes som ett obestämt resultat. För detektion av HCV RNA omvänd transkription-PCR utfördes som tidigare beskrivits (6, 7).

HCV MKB var negativ för 469 prover, varav 456 (97%) också var negativa av UKE SIA. För 13 prover ansågs UKE SIA vara obestämd. Alla 469 av dessa sera var negativa av HCV PCR, och ingen av patienterna utvecklade kliniska eller biokemiska tecken på hepatit under uppföljningen.

HCV MKB var reaktiv för 1 814 prover, varav 1 394 (77%) också var positiva av UKE SIA (Tabell 1). I 240 fall (13%) kunde emellertid inte reaktiviteten i HCV MKB bekräftas av UKE SIA. Lämpliga prover för HCV PCR var tillgängliga för 193 av dessa 240 prover och ett positivt PCR-resultat erhölls med 13 prover. Av dessa blev nio positiva av UKE SIA när de testades igen efter 3 månader, vilket tyder på att dessa patienter hade förvärvat HCV-infektion strax före den första undersökningen. Hos de återstående fyra patienterna, som upprepade gånger testade PCR-positiva trots ett negativt resultat av UKE SIA, kunde immunsuppressiva tillstånd hittas. En hade ett B-celllymfom, en var kroniskt hemodialyserad och två praktiserade intravenös droganvändning. Det har visats tidigare att hos patienter med immunsuppressiva tillstånd är serologiskt svar lågt eller till och med frånvarande (10, 14, 15). Detta kan leda till negativa eller obestämda resultat i serologiska analyser även om individen lider av infektion med HCV (13). Därför bör PCR alltid utföras för patienter med kända immunsuppressiva störningar. De 180 initialt PCR-negativa försökspersonerna förblev negativa av UKE SIA och HCV PCR i upprepade undersökningar under uppföljningen. Dessutom utvecklade dessa patienter inte kliniska eller biokemiska tecken på hepatit. Detta indikerar att i minst dessa 180 prover (10%) inträffade falskt positiva resultat. Vi måste anta att MKB också var falskt positivt i proverna för vilka inget lämpligt material för PCR var tillgängligt, eftersom UKE SIA förblev negativ och ingen av patienterna utvecklade kliniska eller biokemiska tecken på hepatit under uppföljningen. Detta indikerar att så länge inga bättre screeninganalyser är kommersiellt tillgängliga måste alla positiva HCV MKB-resultat bekräftas.

ett obestämt resultat i UKE SIA observerades med 180 av de 1 814 MKB-positiva proverna (10%). Lämpliga prover för HCV PCR erhölls för 134 av dessa 180 prover, och HCV RNA kunde detekteras hos 58 av dem. Under uppföljningen observerades fullständig serokonversion hos fyra patienter. Alla av dem avslöjade initialt antikroppar riktade enbart mot ns3-proteinet i UKE SIA. I uppföljningsprover framkom reaktivitet mot ytterligare rekombinanta proteiner. Dessa resultat stöder det tidigare antagandet att antikroppsreaktivitet mot NS3 spelar en viktig roll i den tidiga serologiska detektionen av HCV-infektion (5). Vidare har en särskilt hög korrelation hittats mellan HCV-viremi och antikroppsreaktivitet mot c33c-antigenet i den kommersiellt tillgängliga RIBA (2). Prover med ett positivt resultat av HCV MKB och ett obestämt resultat genom immunoblot-analys måste utsättas för PCR, eftersom vi upptäckte HCV RNA i 43% av proverna (58 av 134). Andelen obestämda resultat av UKE SIA är anmärkningsvärt låg jämfört med den med RIBA 2.0 eller 3.0 (2, 3, 11, 16). En orsak till detta kan vara att lokala isolat användes för att fastställa UKE SIA, eftersom serologiska tester innehållande rekombinanta proteiner av lokala isolat har visat sig ha bättre känslighet och specificitet än kommersiellt tillgängliga analyser (5, 12). Detta är emellertid osannolikt att vara den enda anledningen, eftersom UKE SIA utvärderades med serumprover innehållande en mängd HCV-genotyper som tidigare beskrivits (5).

diagnosen HCV-positiv har en djup inverkan på den drabbade personens liv. Därför måste den nås så tillförlitligt som möjligt. Våra data indikerar att den allmänt använda HCV MKB ger en hög andel (10%) av falskt positiva resultat. Jämfört med andra screeninganalyser, t.ex. humant immunbristvirus EIAs, är detta oacceptabelt högt. Därför är bekräftelse av alla positiva HCV MKB-resultat genom kompletterande tester obligatorisk. Som vi har visat med vår in-house UKE SIA, är en möjlighet för att förbättra tillförlitligheten av HCV-diagnos att införa proteiner i bekräftelseanalysen som skiljer sig från de som används i screeninganalysen.