Definice Falešně Pozitivní Reakce ve Screeningu Viru Hepatitidy C Protilátky

V denní rutinní laboratorní, spolehlivé diagnózy viru hepatitidy C (HCV) infekce není vždy možné výhradně pomocí HCV enzymoimuno (EIA), neboť je dobře známo, že pro řadu pacientů tohoto testu vytváří falešně pozitivní výsledky (4, 8, 17). Proto musí být výsledky získané EIA potvrzeny dodatečným testováním. Komerčně dostupný test RIBA 2.0 (Chiron Corporation) však nesplňuje kritéria definující potvrzovací test, protože sestává z rekombinantních proteinů identických s proteiny v EIA (1, 5, 9). HCV PCR nelze použít pro potvrzení pozitivní výsledky EIA, protože negativní PCR výsledek nevylučuje možnost infekce HCV s low-level virózy (pod mezí detekce). Kromě toho je PCR příliš pracná a nákladná na to, aby byla pravidelně používána jako potvrzující Test. Proto jsme vytvořili HCV pás immunoblot assay (SIA) (Universitäts-Krankenhaus Eppendorf SIA) se skládá ze čtyř rekombinantní proteiny, získané z jádra a tři nenosné regionů (NS3, NS4, NS5) HCV, které jsou odlišné od těch, které používají v HCV EIA (5).

V této studii jsme porovnávali výsledky z druhé generace HCV EIA s těmi UKE SIA pro 2,283 vzorky séra. Cílem bylo posoudit význam pozitivní výsledky v HCV EIA definovat kritéria pro výkon další testy, které spolehlivě diagnostikovat HCV infekce v každodenní laboratorní rutiny. Séra byla čerpána z 2 283 osob žijících v severním Německu v okolí města Hamburk. Byly zaslány do naší laboratoře v rámci podezření z infekce HCV vzhledem ke zvýšené hodnoty jaterních enzymů (alaninaminotransferáza, >45 U/l) nebo klinické příznaky hepatitidy (žloutenka a horní části břicha) nebo rizikové faktory pro parenterálně přenosných chorob, jako je chronická hemodialýza, transfuze krve, nebo intravenózní užívání drog. V době vyšetřování testovali negativní na akutní infekci HAV (protilátky proti HAV imunoglobulinu M) a HBV (povrchový antigen hepatitidy B). Opakovaná vyšetření byla prováděna jako sledování každé 3 měsíce po dobu 1 roku. Pro sérologický screening druhá generace HCV EIA (Abbott Laboratories, Severní Chicago, nemocný.) byla provedena. Pro potvrzení výsledků HCV EIA byla séra testována paralelně pomocí UKE SIA, jak bylo popsáno výše (5). Imunoblotový test byl považován za pozitivní, pokud byly detekovatelné protilátky proti alespoň dvěma různým rekombinantním proteinům. Reaktivita proti jedinému proteinu byla hodnocena jako neurčitý výsledek. Pro detekci reverzní transkripce HCV RNA byla provedena PCR, jak bylo popsáno výše (6, 7).

HCV EIA byla negativní u 469 vzorků, z nichž 456 (97%) bylo také negativní u UKE SIA. U 13 vzorků byla UKE SIA považována za neurčitou. Všech 469 těchto sér bylo HCV PCR negativních a u žádného z pacientů se během sledování nevyskytly klinické nebo biochemické příznaky hepatitidy.

HCV EIA byla reaktivní za 1,814 vzorků, z nichž 1,394 (77%) byly také pozitivní UKE SIA (Tabulka 1). Ve 240 případech (13%) však reaktivita v HCV EIA nemohla být potvrzena UKE SIA. Vhodné vzorky pro HCV PCR byly k dispozici pro 193 z těchto 240 vzorků a pozitivní výsledek PCR byl získán u 13 vzorků. Z nich devět bylo pozitivních u UKE SIA při opakovaném testování po 3 měsících, což naznačuje, že tito pacienti získali infekci HCV krátce před prvním vyšetřením. U zbývajících čtyř pacientů, kteří opakovaně testovány PCR pozitivní i přes negativní výsledek UKE SIA, immunosuppressing podmínky lze nalézt. Jeden měl B-buněčný lymfom, jeden byl chronicky hemodialyzován a dva praktikovali intravenózní užívání drog. Dříve bylo prokázáno, že u pacientů s imunosupresivními stavy je sérologická odpověď nízká nebo dokonce chybí (10, 14, 15). To by mohlo vést k negativním nebo neurčitým výsledkům sérologických testů, i když jedinec trpí infekcí HCV (13). Proto by u pacientů se známými imunosupresivními poruchami měla být vždy provedena PCR. 180 původně PCR negativních subjektů zůstalo při opakovaných vyšetřeních během sledování negativní u UKE sia a HCV PCR. U těchto pacientů se navíc nevyvinuly klinické nebo biochemické příznaky hepatitidy. To naznačuje, že alespoň u těchto 180 vzorků (10%) došlo k falešně pozitivním výsledkům. Musíme předpokládat, že EIA byl také falešně pozitivní u vzorků, pro které není vhodný materiál pro PCR byla k dispozici, protože UKE SIA zůstal negativní a žádný z pacientů se vyvinuly klinické nebo biochemické příznaky hepatitidy během follow-up. To naznačuje, že pokud nejsou komerčně dostupné lepší screeningové testy, musí být potvrzen každý pozitivní výsledek HCV EIA.

neurčitý výsledek v UKE SIA byla pozorována s 180 1,814 EIA-pozitivní vzorky (10%). Vhodné vzorky pro HCV PCR byly získány pro 134 z těchto 180 vzorků a HCV RNA mohla být detekována v 58 z nich. Během sledování byla u čtyř pacientů pozorována úplná sérokonverze. Všechny z nich zpočátku odhalily protilátky namířené výhradně proti proteinu NS3 UKE SIA. V následných vzorcích se objevila reaktivita proti dalším rekombinantním proteinům. Tyto výsledky podporují předchozí předpoklad, že reaktivita protilátek proti NS3 hraje důležitou roli v časné sérologické detekci infekce HCV (5). Kromě toho byla zjištěna zvláště vysoká korelace mezi HCV viremií a reaktivitou protilátek proti antigenu c33c komerčně dostupného RIBA (2). Vzorky s pozitivním výsledkem u HCV EIA a neurčitý výsledek immunoblot assay musí být podrobeny PCR, protože jsme detekována HCV RNA u 43% vzorků (58 134). Procento neurčitých výsledků uke SIA je pozoruhodně nízké ve srovnání s procentem RIBA 2.0 nebo 3.0 (2, 3, 11, 16). Jedním z důvodů může být, že místní izolátů byly použity pro stanovení UKE SIA, jelikož sérologické testy obsahující rekombinantní proteiny místní izolátů bylo prokázáno, že mají lepší citlivost a specifičnost, než komerčně dostupné testy (5, 12). Je však nepravděpodobné, že by to byl jediný důvod, protože uke SIA byla hodnocena pomocí vzorků séra obsahujících různé genotypy HCV, jak bylo popsáno výše (5).

diagnóza HCV pozitivní má hluboký dopad na život postižené osoby. Proto musí být dosaženo co nejspolehlivěji. Naše údaje naznačují, že široce používaná HCV EIA produkuje vysoké procento (10%) falešně pozitivních výsledků. Ve srovnání s jinými screeningovými testy, např. EIAs viru lidské imunodeficience, je to nepřijatelně vysoké. Potvrzení každého pozitivního výsledku HCV EIA doplňkovými testy je proto povinné. Jak jsme ukázali s naší interní UKE SIA, jednou z možností pro zlepšení spolehlivosti diagnózy HCV je zavedení proteinů do potvrzovacího testu, které se liší od proteinů použitých při screeningovém testu.