Definição de Falso-Positivo de Reações na Triagem para o Vírus da Hepatite C Anticorpos

na rotina diária laboratorial, o diagnóstico fiável da infecção pelo vírus da hepatite C (VHC) nem sempre é possível pela utilização única de um imunoensaio enzimático do VHC (AIA), uma vez que é bem conhecido que, para um certo número de doentes, este ensaio produz resultados falsos-positivos (4, 8, 17). Por conseguinte, os resultados obtidos pela AIA têm de ser confirmados por testes adicionais. No entanto, o ensaio disponível no mercado RIBA 2.0 (Chiron Corporation) não cumpre os critérios que definem um ensaio de confirmação, uma vez que consiste em proteínas recombinantes idênticas às da AIE (1, 5, 9). A PCR do VHC não pode ser utilizada para confirmação de resultados positivos de AIA, uma vez que um resultado negativo de PCR não exclui a possibilidade de infecção por VHC com viremia de baixo nível (abaixo do limite de detecção). Além disso, a PCR é muito trabalhosa e cara para ser usada regularmente como um teste de confirmação. Por conseguinte, estabelecemos um ensaio de IMUNOBLOT de VHC (SIA) (Universitäts-Krankenhaus Eppendorf SIA) constituído por quatro proteínas recombinantes, derivadas do núcleo e de três regiões não estruturais (NS3, NS4 e NS5) do VHC, que são diferentes das utilizadas na AIA do VHC (5).

no presente estudo comparámos os resultados de uma segunda geração de VHC EIA com os da UKE SIA para 2 283 amostras de soro. O objectivo era avaliar a importância dos resultados positivos na AIA do VHC, a fim de definir critérios para a realização de novos testes para diagnosticar de forma fiável a infecção do VHC na rotina diária laboratorial. Sera foi desenhado a partir de 2.283 pessoas que vivem no norte da Alemanha em torno da cidade de Hamburgo. Eles foram enviadas para o nosso laboratório, sob suspeita de infecção pelo VHC devido a elevados valores das enzimas hepáticas (alanina aminotransferase, >45 U/l) ou sinais clínicos da hepatite (icterícia e dor abdominal superior) ou fatores de risco para doenças de transmissão parenteral, como a crônica, hemodiálise, transfusões de sangue ou uso de drogas intravenosas. Na altura da investigação, apresentaram resultados negativos no que respeita à infecção aguda com VHA (anticorpos anti-VHA imunoglobulina M) e VHB (antigénio de superfície da hepatite B). Foram realizados exames repetidos de 3 em 3 meses durante um ano. Para rastreio serológico, uma segunda geração de VHC EIA (Abbott Laboratories, North Chicago, Ill.) foi realizada. Para confirmação dos resultados da VHC EIA, os soros foram testados em paralelo pela UKE SIA, tal como descrito anteriormente (5). O ensaio imunoblot foi considerado positivo quando foram detectáveis anticorpos a, pelo menos, duas proteínas recombinantes diferentes. A reactividade contra apenas uma única proteína foi considerada como um resultado indeterminado. Para a detecção de ARN do VHC, a transcrição reversa-PCR foi efectuada como descrito anteriormente (6, 7).

a AIA do VHC foi negativa para 469 amostras, das quais 456 (97%) também foram negativas pela UKE SIA. Para 13 amostras, a uke SIA foi considerada indeterminada. Todos os 469 destes soros foram negativos pela PCR do VHC, e nenhum dos doentes desenvolveu sinais clínicos ou bioquímicos de hepatite durante o acompanhamento.

a AIA do VHC foi reactiva em 1 814 amostras, das quais 1 394 (77%) foram também positivas pela UKE SIA (Quadro 1). No entanto, em 240 casos (13%), a reactividade na AIA do VHC não pôde ser confirmada pela UKE SIA. Estavam disponíveis espécimes adequados para a PCR do VHC para 193 destas 240 amostras, tendo sido obtido um resultado positivo para a PCR com 13 amostras. Destes, nove tornaram-se positivos pela uke SIA quando foram novamente testados após 3 meses, o que sugere que estes doentes tinham adquirido infecção por VHC pouco antes do primeiro exame. Nos restantes quatro doentes, que testaram repetidamente PCR positivo apesar de um resultado negativo pela uke SIA, foram encontradas condições imunossupressoras. Um tinha um linfoma de células B, Um era cronicamente hemodializado, e dois praticavam o uso de drogas intravenosas. Foi demonstrado anteriormente que, em doentes com condições imunossupressoras, a resposta serológica é baixa ou mesmo ausente (10, 14, 15). Isto pode levar a resultados negativos ou indeterminados em testes serológicos, embora o indivíduo sofra de infecção por VHC (13). Assim, em doentes com distúrbios imunossupressores conhecidos, a PCR deve ser sempre realizada. Os 180 indivíduos inicialmente PCR-negativos permaneceram negativos por uke SIA e PCR VHC em exames repetidos durante o acompanhamento. Além disso, estes doentes não desenvolveram sinais clínicos ou bioquímicos de hepatite. Isto indica que, pelo menos nestas 180 amostras (10%), ocorreram resultados falsos-positivos. Devemos assumir que a EIA também foi falso positivo nas amostras para as quais não estava disponível material adequado para PCR, uma vez que o uke SIA permaneceu negativo e nenhum dos pacientes desenvolveu sinais clínicos ou bioquímicos de hepatite durante o acompanhamento. Isto indica que, enquanto não estiverem disponíveis comercialmente melhores ensaios de rastreio, todos os resultados positivos do VHC EIA devem ser confirmados.

Um resultado indeterminado no UKE SIA foi observado com 180 da 1,814 EIA-amostras positivas (10%). Foram obtidas amostras adequadas para a PCR do VHC para 134 destas 180 amostras, podendo o ARN do VHC ser detectado em 58 delas. Durante o seguimento foi observada seroconversão completa em quatro doentes. Todos eles inicialmente revelaram anticorpos dirigidos apenas contra a proteína NS3 da uke SIA. Em amostras de seguimento, surgiu reactividade contra proteínas recombinantes adicionais. Estes resultados corroboram o pressuposto anterior de que a reactividade de anticorpos contra o NS3 desempenha um papel importante na detecção serológica precoce da infecção pelo VHC (5). Além disso, verificou-se uma correlação particularmente elevada entre a VIRMIA do VHC e a reactividade de anticorpos contra o antigénio c33c da RIBA comercialmente disponível (2). As amostras com resultado positivo na VHC EIA e um resultado indeterminado na análise imunoblot devem ser submetidas a PCR, uma vez que detectámos ARN do VHC em 43% das amostras (58 de 134). A percentagem de resultados indeterminados pela uke SIA é notavelmente baixa em comparação com a da RIBA 2.0 ou 3.0 (2, 3, 11, 16). Uma das razões para tal pode ser o facto de terem sido utilizados isolados locais para estabelecer a uke SIA, uma vez que os testes serológicos que contêm proteínas recombinantes de isolados locais demonstraram ter uma sensibilidade e especificidade melhores do que os ensaios comercialmente disponíveis (5, 12). Contudo, não é provável que esta seja a única razão, Uma vez que a UKE SIA foi avaliada com amostras de soro que contêm uma variedade de genótipos de VHC, tal como descrito anteriormente (5).

o diagnóstico de VHC positivo tem um impacto profundo na vida da pessoa aflita. Por conseguinte, deve ser alcançado da forma mais fiável possível. Os nossos dados indicam que a AIA do VHC, amplamente utilizada, produz uma elevada percentagem (10%) de resultados falsos positivos. Em comparação com outros testes de rastreio, por exemplo, as Aias do vírus da imunodeficiência humana, este valor é inaceitavelmente elevado. Por conseguinte, é obrigatória a confirmação de todos os resultados positivos da VHC EIA por meio de testes suplementares. Como demonstrámos com a nossa UKE SIA interna, uma possibilidade de melhorar a fiabilidade do diagnóstico do VHC é introduzir proteínas no teste de confirmação que são diferentes das utilizadas no teste de rastreio.