Definitie van Vals-Positieve Reacties in de Screening voor Hepatitis C-Virus Antistoffen

in de dagelijkse laboratoriumroutine is een betrouwbare diagnose van een infectie met het hepatitis C-virus (HCV) niet altijd mogelijk door uitsluitend gebruik van een HCV-enzym-immunoassay (EIA), omdat bekend is dat deze test bij een aantal patiënten vals-positieve resultaten oplevert (4, 8, 17). Daarom moeten de MEB-resultaten door aanvullende tests worden bevestigd. De in de handel verkrijgbare test RIBA 2.0 (Chiron Corporation) voldoet echter niet aan de criteria om een bevestigingstest te definiëren, aangezien deze bestaat uit recombinante eiwitten die identiek zijn aan die in de EIA (1, 5, 9). HCV-PCR kan niet worden gebruikt voor de bevestiging van positieve EIA-resultaten, aangezien een negatief PCR-resultaat de mogelijkheid van HCV-infectie met lage viremie (onder de detectielimiet) niet uitsluit. Voorts is PCR te arbeidsintensief en duur om regelmatig als bevestigende analyse te worden gebruikt. Daarom hebben we een HCV strip immunoblot assay (Sia) vastgesteld (Universitäts-Krankenhaus Eppendorf SIA) bestaande uit vier recombinante eiwitten, afgeleid van de kern en drie niet-structurele regio ‘ s (NS3, NS4 en NS5) van HCV, die verschillen van die welke worden gebruikt in de HCV EIA (5).

in deze studie hebben we de resultaten van een tweede generatie HCV EIA vergeleken met die van de UKE SIA voor 2.283 serummonsters. Het doel was om de significantie van positieve resultaten in de HCV EIA te beoordelen om criteria te definiëren voor de uitvoering van verdere tests om HCV infectie betrouwbaar te diagnosticeren in de dagelijkse laboratoriumroutine. Sera werden getrokken uit 2.283 personen die in Noord-Duitsland rond de stad Hamburg woonden. Ze werden naar ons laboratorium gestuurd onder verdenking van HCV-infectie als gevolg van verhoogde leverenzymwaarden (alanine aminotransferase, >45 E/liter) of klinische tekenen van hepatitis (geelzucht en pijn in de bovenbuik) of risicofactoren voor parenteraal overdraagbare ziekten, zoals chronische hemodialyse, bloedtransfusie, of intraveneus medicijngebruik. Op het moment van onderzoek testten ze negatief voor acute infectie met HAV (anti-HAV immunoglobuline M antilichamen) en HBV (hepatitis B oppervlakte antigeen). Herhaalde onderzoeken werden uitgevoerd als follow-up om de 3 maanden gedurende 1 jaar. Voor serologische screening een tweede generatie HCV EIA (Abbott Laboratories, North Chicago, Ill.) werd uitgevoerd. Ter bevestiging van de resultaten van HCV EIA werden sera parallel getest door de UKE SIA zoals eerder beschreven (5). De immunoblot assay werd als positief beschouwd wanneer antilichamen tegen ten minste twee verschillende recombinante eiwitten aantoonbaar waren. De reactiviteit tegen slechts één enkele proteã ne werd geschat als onbepaald resultaat. Voor de detectie van HCV RNA reverse transcriptie-PCR werd uitgevoerd zoals eerder beschreven (6, 7).

de HCV EIA was negatief voor 469 monsters, waarvan 456 (97%) ook negatief waren voor UKE SIA. Voor 13 monsters werd de UKE SIA als onbepaald beschouwd. Alle 469 van deze sera waren negatief door HCV-PCR en geen van de patiënten ontwikkelde klinische of biochemische tekenen van hepatitis tijdens de follow-up.

de HCV EIA was reactief voor 1.814 monsters, waarvan 1.394 (77%) ook positief waren voor de UKE SIA (Tabel 1). In 240 gevallen (13%) kon de reactiviteit in de HCV EIA echter niet worden bevestigd door UKE SIA. Geschikte monsters voor HCV-PCR waren beschikbaar voor 193 van deze 240 monsters, en een positief PCR-resultaat werd verkregen met 13 monsters. Negen hiervan werden positief door UKE SIA wanneer opnieuw getest na 3 maanden, wat erop wijst dat deze patiënten HCV infectie kort voor het eerste onderzoek hadden verworven. Bij de overige vier patiënten, die herhaaldelijk PCR-positief testten ondanks een negatief resultaat door UKE SIA, konden immunosuppressieve condities worden gevonden. Eén had een B-cellymfoom, één was chronisch hemodialyseerd, en twee oefenden intraveneus drugsgebruik. Eerder is aangetoond dat bij patiënten met immunosuppressieve aandoeningen de serologische respons laag of zelfs afwezig is (10, 14, 15). Dit kan leiden tot negatieve of onbepaalde resultaten in serologische assays hoewel het individu lijdt aan infectie met HCV (13). Daarom dient bij patiënten met bekende immunosuppressieve stoornissen PCR altijd te worden uitgevoerd. De 180 aanvankelijk PCR-negatieve proefpersonen bleven negatief door UKE SIA en HCV PCR in herhaalde onderzoeken tijdens de follow-up. Bovendien ontwikkelden deze patiënten geen klinische of biochemische tekenen van hepatitis. Dit wijst erop dat in ten minste deze 180 monsters (10%) vals-positieve resultaten zijn waargenomen. We moeten aannemen dat de EIA ook vals-positief was in de specimens waarvoor geen geschikt materiaal voor PCR beschikbaar was, aangezien de UKE SIA negatief bleef en geen van de patiënten tijdens de follow-up klinische of biochemische tekenen van hepatitis ontwikkelde. Dit geeft aan dat, zolang er geen betere screeningtests in de handel beschikbaar zijn, elk positief HCV EIA-resultaat moet worden bevestigd.

een onbepaald resultaat in de UKE SIA werd waargenomen met 180 van de 1.814 EIA-positieve monsters (10%). Geschikte specimens voor HCV PCR werden verkregen voor 134 van deze 180 steekproeven, en HCV RNA kon in 58 van hen worden ontdekt. Tijdens de follow-up werd bij vier patiënten volledige seroconversie waargenomen. Allen onthulden aanvankelijk antilichamen die uitsluitend tegen het NS3-eiwit van de UKE-SIA waren gericht. In vervolgmonsters werd reactiviteit tegen additionele recombinante eiwitten waargenomen. Deze resultaten ondersteunen de eerdere aanname dat antilichaamreactiviteit tegen NS3 een belangrijke rol speelt bij de vroege serologische detectie van HCV-infectie (5). Bovendien is een bijzonder hoge correlatie gevonden tussen HCV-viremie en antilichaamreactiviteit tegen het c33c-antigeen van het in de handel verkrijgbare RIBA (2). Monsters met een positief resultaat door HCV EIA en een onbepaald resultaat door immunoblot assay moeten worden onderworpen aan PCR, omdat we HCV RNA in 43% van de monsters (58 van 134) gedetecteerd. Het percentage van Onbepaalde resultaten door de UKE SIA is opmerkelijk laag in vergelijking met die door RIBA 2.0 of 3.0 (2, 3, 11, 16). Een van de redenen hiervoor zou kunnen zijn dat lokale isolaten werden gebruikt om de UKE SIA vast te stellen, aangezien serologische tests met recombinante eiwitten van lokale isolaten een betere gevoeligheid en specificiteit hebben dan in de handel verkrijgbare tests (5, 12). Het is echter onwaarschijnlijk dat dit de enige reden is, aangezien de UKE-SIA werd geëvalueerd met serummonsters die een verscheidenheid aan HCV-genotypen bevatten zoals eerder beschreven (5).

de diagnose HCV-positief heeft een diepe impact op het leven van de getroffen persoon. Daarom moet het zo betrouwbaar mogelijk worden bereikt. Uit onze gegevens blijkt dat de veelgebruikte HCV EIA een hoog percentage (10%) vals-positieve resultaten oplevert. In vergelijking met andere screening assays, b.v., humaan immunodeficiëntievirus EIAs, dit is onaanvaardbaar hoog. Daarom is bevestiging van elk positief HCV EIA-resultaat met aanvullende tests verplicht. Zoals we hebben aangetoond met onze in-house UKE SIA, een mogelijkheid voor het verbeteren van de betrouwbaarheid van HCV diagnose is om eiwitten in de bevestiging assay die verschillen van die gebruikt in de screening assay.