definiția reacțiilor fals pozitive în screeningul pentru anticorpii virusului hepatitei C

în rutina zilnică de laborator, diagnosticul fiabil al infecției cu virusul hepatitei C (VHC) nu este întotdeauna posibil prin utilizarea exclusivă a unui test imunologic enzimatic VHC (EIA), deoarece este bine cunoscut faptul că pentru un număr de pacienți acest test produce rezultate fals pozitive (4, 8, 17). Prin urmare, rezultatele obținute de EIA trebuie confirmate prin teste suplimentare. Cu toate acestea, testul disponibil comercial RIBA 2.0 (Chiron Corporation) nu îndeplinește criteriile care definesc un test de confirmare, deoarece constă în proteine recombinante identice cu cele din EIA (1, 5, 9). PCR HCV nu poate fi utilizat pentru confirmarea rezultatelor EIA pozitive, deoarece un rezultat PCR negativ nu exclude posibilitatea infecției cu VHC cu viremie de nivel scăzut (sub limita de detectare). Mai mult, PCR este prea laborios și costisitor pentru a fi utilizat în mod regulat ca test de confirmare. Prin urmare, am stabilit un test de imunoblot cu bandă VHC (sia) (Universit Xvts-Krankenhaus Eppendorf sia) format din patru proteine recombinante, derivate din miez și trei regiuni nestructurale (NS3, NS4 și NS5) ale VHC, care sunt diferite de cele utilizate în EIA VHC (5).

în studiul de față am comparat rezultatele unei EIM VHC de a doua generație cu cele ale uke SIA pentru 2.283 de probe de ser. Scopul a fost de a evalua semnificația rezultatelor pozitive în EIM VHC pentru a defini criterii pentru efectuarea de teste suplimentare pentru a diagnostica în mod fiabil infecția cu VHC în rutina zilnică de laborator. Serurile au fost extrase de la 2.283 de persoane care locuiau în nordul Germaniei în jurul orașului Hamburg. Au fost trimise la laboratorul nostru sub suspiciunea de infecție cu VHC din cauza valorilor crescute ale enzimelor hepatice (alanin aminotransferază, >45 U/litru) sau semne clinice de hepatită (icter și dureri abdominale superioare) sau factori de risc pentru boli cu transmitere parenterală, cum ar fi hemodializa cronică, transfuzia de sânge sau consumul de droguri intravenoase. La momentul investigației, testul a fost negativ pentru depistarea infecției acute cu VHA (anticorpi anti-VHA imunoglobulină M) și VHB (antigen de suprafață hepatitic B). Examinările repetate au fost efectuate ca urmărire la fiecare 3 luni timp de 1 an. Pentru screening-ul serologic a doua generație HCV EIA (Abbott Laboratories, North Chicago, Ill.) a fost efectuată. Pentru confirmarea rezultatelor EIM VHC, serurile au fost testate în paralel de către SIA UKE, așa cum s-a descris anterior (5). Testul imunoblot a fost considerat pozitiv atunci când au fost detectați anticorpi la cel puțin două proteine recombinante diferite. Reactivitatea împotriva unei singure proteine a fost evaluată ca rezultat nedeterminat. Pentru detectarea ARN VHC transcripția inversă-PCR a fost efectuată așa cum s-a descris anterior (6, 7).

EIA VHC a fost negativă pentru 469 de probe, dintre care 456 (97%) au fost, de asemenea, negative pentru uke SIA. Pentru 13 eșantioane, uke SIA a fost considerată nedeterminată. Toate cele 469 de seruri au fost negative prin PCR VHC și niciunul dintre pacienți nu a prezentat semne clinice sau biochimice de hepatită în timpul urmăririi.

EIA VHC a fost reactivă pentru 1814 probe, dintre care 1394 (77%) au fost, de asemenea, pozitive de către SIA UKE (Tabelul 1). Cu toate acestea, în 240 de cazuri (13%) reactivitatea în EIM VHC nu a putut fi confirmată de uke SIA. Au fost disponibile probe adecvate pentru PCR VHC pentru 193 din aceste 240 de probe și s-a obținut un rezultat PCR pozitiv cu 13 probe. Dintre acestea, nouă au devenit pozitive prin uke SIA când au fost retestate după 3 luni, ceea ce sugerează că acești pacienți au dobândit infecție cu VHC cu puțin timp înainte de prima examinare. La ceilalți patru pacienți, care au testat în mod repetat PCR pozitiv, în ciuda unui rezultat negativ al UKE SIA, s-au găsit condiții imunosupresoare. Unul a avut un limfom cu celule B, unul a fost hemodializat cronic și doi au practicat consumul de droguri intravenoase. Sa demonstrat anterior că la pacienții cu afecțiuni imunosupresoare, răspunsul serologic este scăzut sau chiar absent (10, 14, 15). Acest lucru ar putea duce la rezultate negative sau nedeterminate în testele serologice, deși individul suferă de infecție cu VHC (13). Prin urmare, pentru pacienții cu tulburări imunosupresoare cunoscute, PCR trebuie întotdeauna efectuat. Cei 180 de subiecți negativi inițial PCR au rămas negativi prin uke SIA și HCV PCR în examinările repetate în timpul urmăririi. Mai mult, acești pacienți nu au dezvoltat semne clinice sau biochimice de hepatită. Acest lucru indică faptul că în cel puțin aceste 180 de probe (10%) au apărut rezultate fals pozitive. Trebuie să presupunem că EIA a fost, de asemenea, fals pozitiv la exemplarele pentru care nu a fost disponibil material adecvat pentru PCR, deoarece UKE SIA a rămas negativ și niciunul dintre pacienți nu a dezvoltat semne clinice sau biochimice de hepatită în timpul urmăririi. Acest lucru indică faptul că, atâta timp cât nu sunt disponibile în comerț teste de screening mai bune, fiecare rezultat pozitiv al EIM VHC trebuie confirmat.

un rezultat nedeterminat în SIA UKE a fost observat la 180 din cele 1.814 probe EIA pozitive (10%). Au fost obținute probe adecvate pentru PCR VHC pentru 134 din aceste 180 de probe, iar ARN VHC ar putea fi detectat în 58 dintre ele. În timpul urmăririi, seroconversia completă a fost observată la patru pacienți. Toți au dezvăluit inițial anticorpi direcționați exclusiv împotriva proteinei NS3 a UKE sia. În probele de urmărire, a apărut reactivitatea împotriva proteinelor recombinante suplimentare. Aceste rezultate susțin ipoteza anterioară că reactivitatea anticorpilor împotriva NS3 joacă un rol important în detectarea serologică timpurie a infecției cu VHC (5). În plus, s-a constatat o corelație deosebit de mare între viremia VHC și reactivitatea anticorpilor împotriva antigenului C33C al RIBA (2) disponibil în comerț. Probele cu un rezultat pozitiv prin EIA VHC și un rezultat nedeterminat prin testul imunoblot trebuie supuse PCR, deoarece am detectat ARN VHC în 43% din probe (58 din 134). Procentul rezultatelor nedeterminate de către UKE SIA este remarcabil de scăzut în comparație cu cel al RIBA 2.0 sau 3.0 (2, 3, 11, 16). Un motiv pentru aceasta ar putea fi faptul că izolatele locale au fost utilizate pentru a stabili SIA UKE, deoarece testele serologice care conțin proteine recombinante ale izolatelor locale s-au dovedit a avea o sensibilitate și o specificitate mai bune decât testele disponibile în comerț (5, 12). Cu toate acestea, este puțin probabil ca acesta să fie singurul motiv, deoarece SIA UKE a fost evaluată cu probe de ser conținând o varietate de genotipuri VHC, așa cum s-a descris anterior (5).

diagnosticul VHC pozitiv are un impact profund asupra vieții persoanei afectate. Prin urmare, trebuie să fie atins cât mai fiabil posibil. Datele noastre indică faptul că EIM HCV utilizat pe scară largă produce un procent ridicat (10%) de rezultate fals pozitive. Comparativ cu alte teste de screening, de exemplu, virusul imunodeficienței umane EIA, acest lucru este inacceptabil de mare. Prin urmare, confirmarea fiecărui rezultat pozitiv al EIM VHC prin teste suplimentare este obligatorie. Așa cum am arătat cu uke sia intern, o posibilitate de îmbunătățire a fiabilității diagnosticului VHC este de a introduce proteine în testul de confirmare care sunt diferite de cele utilizate în testul de screening.